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TTC染色

TTC染色是TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng),生成紅色的甲臜,用來表示細(xì)胞的活力。它是評價腦缺血損傷常用的指標(biāo)。

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實驗介紹

【實驗原理】

TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復(fù)合物,它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色,而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降,不能反應(yīng),故不會產(chǎn)生變化呈蒼白。故可以用來染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。


【實驗方法】

Step1取腦:可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦。因為腦組織未用多聚甲醛固定,所以較軟,取腦時更應(yīng)仔細(xì),保持大腦的完整性;

Step2:-20℃冰箱中速凍20分鐘左右,便于切片;

Step3:切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計算面積的話,應(yīng)切得均勻或用專門的腦槽;

Step4:將切片置于2%TTC中;

Step5:用錫箔紙蓋住后,放入37℃溫箱15~30min,不時翻動腦片,使均勻接觸到染色液;

Step6:取出切片后擺放整齊拍照。



案例展示

TTC案例_副本.jpg



技術(shù)總結(jié)

【常見問題】

1、染色過淺:染色時間不夠,適當(dāng)延長染色時間;

2、切片破碎:取材不當(dāng),取腦時更應(yīng)仔細(xì),保持大腦的完整性?;蛩賰鰰r間不夠,切片時組織過軟,適當(dāng)延長冷凍時間


【注意事項】

1、因為腦組織未用多聚甲醛固定,所以較軟,取腦時更應(yīng)仔細(xì),保持大腦的完整性;

2、切片時第一刀在腦前極與視交叉連線中點處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計算面積的話,應(yīng)切得均勻或用專門的腦槽。



送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型樣品需求保存條件運(yùn)輸條件備注
新鮮組織新鮮取材組織,用 PBS清洗干凈血液等,立即-80℃保存;-80℃干冰所有樣本均須有唯一標(biāo)記,且標(biāo)記清晰可識。
一般固定組織一般組織體積不超過2cmX2cmX0.5cm,固定時盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分,如腸道內(nèi)容物;固定液體積為組織大小的10倍以上,容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標(biāo)注好固定液類型和固定時長;常溫常溫
特殊固定組織睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織:推薦使用對應(yīng)的特殊固定液進(jìn)行固定,以保證固定效果。如Bouin液,適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定;

組織蠟塊組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋(尺寸為30*24*7mm),石蠟與組織要均勻接合,不能有裂痕;蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定,有效厚度至少要超過0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊,超過半年的蠟塊抗原可能丟失,做免疫組化可能出現(xiàn)檢測不到蛋白;常溫常溫
組織切片需用防脫載玻片進(jìn)行撈片,并注明切片厚度、已烤片溫度與時間,組織應(yīng)在靠近切片下端 1/3 處;4℃冰袋
細(xì)胞爬片使用 12 孔板或 24孔板專用細(xì)胞爬片,細(xì)胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次,保存在 PBS 中,用封口膜密封孔板。每個爬片在孔板蓋上應(yīng)有唯一的標(biāo)記,并有電子版的分組信息,以防標(biāo)記在運(yùn)輸途中模糊;常溫常溫
植物樣本新鮮組織FAA固定,木質(zhì)化程度不高;對于較薄的葉片,如果要求平行葉片切片,難以保證切完整;根莖要求直徑>1mm;常溫常溫
抗體保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識別此抗體的標(biāo)記,并附帶說明書,抗體的量應(yīng)大于實驗所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計算抗體用量, 24 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl一張計算抗體用量,12 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計算抗體用量。-20℃冰袋或干冰


病理交付標(biāo)準(zhǔn).jpg


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