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實(shí)驗介紹
【實(shí)驗原理】
剛果紅是一種分子為長線狀況的偶氮染料，它以胺基和淀粉樣物質(zhì)的羥基結(jié)合，平行的附著在淀粉樣物質(zhì)的纖維上而顯紅色，將其染成紅色復(fù)合物，對纖維二糖和葡萄糖無作用，可用此來鑒別纖維素或纖維素分解菌的分解作用。
【實(shí)驗方法】
Step1：石蠟切片常規(guī)操作脫蠟水化；
Step2：甲醇剛果紅染色液染10-20min；
Step3：用堿性乙醇分化液分化數(shù)秒，自來水沖洗5min；
Step4：蘇木素復(fù)染2min，自來水沖洗10min；
Step5：脫水：依次經(jīng)85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒、無水乙醇Ⅰ30s、無水乙醇Ⅱ1min；
Step6：透明：經(jīng)二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min；
Step7：中性樹膠固封，鏡檢。
案例展示
技術(shù)總結(jié)
【常見問題】
1、染色時間過長或過短導(dǎo)致的染色過深或過淺；
2、堿性乙醇分化不足，導(dǎo)致組織染色陽性過淺；
3、植物組織較脆，易出現(xiàn)掉片；
4、淀粉與彈力纖維都著染剛果紅顏色，二者在形態(tài)上有所不同，應(yīng)注意區(qū)別；
5、用堿性酒精分化時要掌握恰當(dāng)，若分化不足，膠原纖維也可著色，分化過度時淀粉樣蛋白也可脫色；
6、淀粉樣物質(zhì)未染色的蠟片，再存放一年后，將逐漸減弱與歸于剛果紅結(jié)合的能力。
【注意事項】
1、控制染色時間，保證染色不至于過深或過淺，必要時可在顯微鏡下觀察控制染色時間；
2、分化時間不易過長，保證陽性顯色清晰可見；
3、減少掉片風(fēng)險。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運(yùn)輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS清洗干凈血液等，立即-80℃保存； | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識。 |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過2cmX2cmX0.5cm，固定時盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內(nèi)容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標(biāo)注好固定液類型和固定時長； | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對應(yīng)的特殊固定液進(jìn)行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定； | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標(biāo)準(zhǔn)的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據(jù)所需切片的數(shù)量而定，有效厚度至少要超過0.1cm。盡量提供半年內(nèi)的組織蠟塊，超過半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現(xiàn)檢測不到蛋白； | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進(jìn)行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時間，組織應(yīng)在靠近切片下端 1/3 處； | 4℃ | 冰袋 | |
| 細(xì)胞爬片 | 使用 12 孔板或 24孔板專用細(xì)胞爬片，細(xì)胞爬片經(jīng)固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個爬片在孔板蓋上應(yīng)有唯一的標(biāo)記，并有電子版的分組信息，以防標(biāo)記在運(yùn)輸途中模糊； | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質(zhì)化程度不高；對于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm； | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應(yīng)有能夠識別此抗體的標(biāo)記，并附帶說明書，抗體的量應(yīng)大于實(shí)驗所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計算抗體用量， 24 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl一張計算抗體用量，12 孔板細(xì)胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
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在線時間：8:00-24:00
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