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血管生成

血管生長是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。無論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤,一旦生長直徑超過1~2 mm,都會有血管生成,這是由于腫瘤細胞自身可分泌多種生長因子,誘導(dǎo)血管生成。

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實驗介紹

【應(yīng)用簡介】

血管生長是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。無論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤,一旦生長直徑超過1~2 mm,都會有血管生成,這是由于腫瘤細胞自身可分泌多種生長因子,誘導(dǎo)血管生成。多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長迅速,因此,血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用,抑制這一過程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴散轉(zhuǎn)移。體外的血管生成實驗?zāi)芎芎玫哪M腫瘤的血管發(fā)生過程,并且適合研究藥物對這一過程的影響。


【技術(shù)原理】

應(yīng)用Matrigel模擬機體環(huán)境,上面接種腫瘤細胞,觀察血管生成情況。


【實驗方法】

Step1:細胞培養(yǎng)

Step2:細胞轉(zhuǎn)染或藥物處理

Step3:鋪Matrigel膠

Step4:接種細胞

Step5:觀察血管生成情況

案例展示

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與對照組相比,處理因素能夠明顯抑制血管生成。

技術(shù)總結(jié)

1、實驗前一天需要將Matrigel置于冰盒,放入冰箱中,同時需要準備一些預(yù)冷的槍頭用于吸取Matrigel膠;

2、將Matrigel膠加到血管生成載玻片時注意槍頭要垂直于內(nèi)孔的正上方加入Matrigel,防止有Matrigel流經(jīng)上孔而留下殘留膠;

3、需要按照細胞的生長速度定時采集圖像,并且對其成管長度、覆蓋面積、成環(huán)數(shù)和結(jié)點進行測量和記錄,并且對其進行統(tǒng)計分析;

4、分上下孔的ibidi血管生成載玻片能去除凹液面,使成像效果更好。

送檢與交付標準

樣品類型樣品需求保存條件運輸條件備注
凍存細胞

1.取對數(shù)生長期的細胞,消化離心收集細胞,加入凍存液吹打混勻,裝入凍存管,標明細胞名稱/細胞代數(shù),凍存細胞數(shù)量在1-5*106個/ml。

2.項目啟動后細胞復(fù)蘇,復(fù)蘇后3天反饋細胞狀態(tài),3-5天反饋細胞污染情況,5-7天反饋支原體污染情況。

3. 細胞詳細信息(名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等,如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息)

液氮干冰所有樣本均須有唯一標記,且標記清晰可識
復(fù)蘇后細胞

1.使用T25培養(yǎng)瓶運輸。細胞匯合度達到60%以上,裝滿培養(yǎng)液,只留紐扣大小的氣泡,瓶口用封口膜封好,標明細胞名稱/細胞代數(shù)/接種時間/培養(yǎng)基類型,瓶子固定運輸。

2.收到細胞后3天反饋細胞狀態(tài),3-5天反饋細胞污染情況,5-7天反饋支原體污染情況。

3. 細胞詳細信息(名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等,如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息)

常溫常溫
質(zhì)粒

1.純度高,無內(nèi)毒素,無蛋白質(zhì),基因組DNA/RNA污染,質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間

2.濃度不低于0.5μg/μl,總量大于100μg,無內(nèi)毒素處理

3. 載體詳細信息,包括名稱、大小、抗性、熒光標記

-20℃冰袋
病毒

1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,體積約200μl,標明制備時間,且沒有反復(fù)凍融

2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,體積約200μl,標明制備時間,且沒有反復(fù)凍融

3.明確是否表達熒光標簽蛋白及其種類,最好需要提供病毒載體圖譜;

-80℃干冰




細胞交付標準.jpg

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