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實驗介紹
【技術原理】
抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及相對定量。
【實驗流程】
案例展示
技術總結
【常見問題】
1、無/弱染色
烤片溫度過高，推薦56℃-60℃1-2h；
一抗是否適用固定液和石蠟切片，使用濃度是否過低，孵育是否時間過短等。
2、非特異性背景染色
是否滅活內源性過氧化物酶；
孵育過程中干片；
抗原熱修復過度。
3、染色過深
一抗?jié)舛冗^高；
染色試濃度過高或孵育時間過長；
染色劑濃度過高或孵育時間過長。
【注意事項】
1、使用3%過氧化氫溶液消除內源性過氧化酶活性時，請勿孵育過長時間，一般為5—10分鐘；
2、對于較易產生脫片的部分組織如皮膚、骨組織、腦組織等盡量避免使用微波修復和高壓修復，減少其脫片的風險；
3、使用DAB顯色時，顯色劑停留時間過長會造成染色過深，可根據實驗溫度及實驗結果適當調整染色時間。
送檢和交付標準
| 樣品類型 | 樣品需求 | 保存條件 | 運輸條件 | 備注 |
|---|---|---|---|---|
| 新鮮組織 | 新鮮取材組織，用 PBS 清洗干凈血液等，立即-80℃保存 | -80℃ | 干冰 | 所有樣本均須有唯一標記，且標記清晰可識 |
| 一般固定組織 | 一般組織體積不超過2cmX2cmX0.5cm，固定時盡量保持組織的原有形態(tài)并清理干凈血液及多余部分，如腸道內容物；固定液體積為組織大小的10倍以上，容器足夠容納組織不使其擠壓變形。標注好固定液類型和固定時長 | 常溫 | 常溫 | |
| 特殊固定組織 | 睪丸、眼球、脊髓、肌肉等組織：推薦使用對應的特殊固定液進行固定，以保證固定效果。如Bouin液，適用于睪丸組織、皮膚組織及眼球的固定 | |||
| 組織蠟塊 | 組織由標準的石蠟包埋盒包埋（尺寸為30*24*7mm），石蠟與組織要均勻接合，不能有裂痕；蠟塊厚度根據所需切片的數量而定，有效厚度至少要超過 0.1cm。盡量提供半年內的組織蠟塊，超過半年的蠟塊抗原可能丟失，做免疫組化可能出現檢測不到蛋白。 | 常溫 | 常溫 | |
| 組織切片 | 需用防脫載玻片進行撈片，并注明切片厚度、已烤片溫度與時間，組織應在靠近切片下端 1/3 處。 | 4℃ | 冰袋 | |
| 細胞爬片 | 使用 12 孔板或 24 孔板專用細胞爬片，細胞爬片經固定后用 PBS 洗滌 2~3 次，保存在 PBS 中，用封口膜密封孔板。每個爬片在孔板蓋上應有唯一的標記，并有電子版的分組信息，以防標記在運輸途中模糊。 | 常溫 | 常溫 | |
| 植物樣本 | 新鮮組織FAA固定，木質化程度不高；對于較薄的葉片，如果要求平行葉片切片，難以保證切完整；根莖要求直徑>1mm | 常溫 | 常溫 | |
| 抗體 | 保存抗體的抗體管上應有能夠識別此抗體的標記，并附帶說明書，抗體的量應大于實驗所需的量。組織切片、組織芯片按稀釋后 100μl 一張切片計算抗體用量， 24 孔板細胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 200μl 一張計算抗體用量，12 孔板細胞爬片圓形蓋玻片按稀釋后 400μl 一張計算抗體用量。 | -20℃ | 冰袋或干冰 |
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
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