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細(xì)胞侵襲

腫瘤細(xì)胞通過膜表面特定受體與基質(zhì)或基底膜的層粘連蛋白、纖維連接蛋白和IV型膠原等相粘連，然后腫瘤細(xì)胞可釋放蛋白水解酶或激活基質(zhì)中已存在的酶原，使基質(zhì)成分降解，最后腫瘤細(xì)胞運動而充填到被水解了的基質(zhì)的空隙處，如此三個過程不斷重復(fù)腫瘤細(xì)胞不斷向深層侵襲。

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2026-02-17 10:04:40

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2026-02-17 04:47:54

收起

實驗介紹

【應(yīng)用簡介】

【技術(shù)原理】

本實驗采用的Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV型膠原等。將Matrigel鋪在Transwell侵襲小室的多孔濾膜上，能形成與天然基底膜極為相似的基底膜結(jié)構(gòu)。具有侵襲能力的細(xì)胞在趨化劑誘導(dǎo)下可穿過多孔濾膜，侵襲細(xì)胞經(jīng)染色后，在顯微鏡下觀察和計數(shù)。

【實驗方法】

Step1：制備條件培養(yǎng)基

Step2：包被基底膜

Step3：水化基底膜

Step4：接種細(xì)胞

Step5：培養(yǎng)細(xì)胞

Step6：固定及染色

Step7：鏡檢

案例展示

細(xì)胞劃痕_副本.jpg

技術(shù)總結(jié)

1、24孔板下室一般加入600ul的培養(yǎng)基，特別注意的是，下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生，一旦產(chǎn)生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現(xiàn)氣泡，要將小空提起，去除氣泡，再將小室放進培養(yǎng)板；

2、接種的細(xì)胞應(yīng)選擇處于對數(shù)生長期且狀態(tài)良好，細(xì)胞計數(shù)需準(zhǔn)確；

3、待細(xì)胞遷出，且形態(tài)展開后即可固定染色；

4、染色后，可用棉簽輕輕擦掉上層未遷出細(xì)胞；

5、拍照時，同一視野不可重復(fù)拍照，膜上小孔清晰，細(xì)胞形態(tài)明顯，所有照片的背景需統(tǒng)一。

送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型	樣品需求	保存條件	運輸條件	備注
凍存細(xì)胞	1.取對數(shù)生長期的細(xì)胞，消化離心收集細(xì)胞，加入凍存液吹打混勻，裝入凍存管，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)，凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*10⁶個/ml。 2.項目啟動后細(xì)胞復(fù)蘇，復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息）	液氮	干冰	所有樣本均須有唯一標(biāo)記，且標(biāo)記清晰可識
復(fù)蘇后細(xì)胞	1.使用T25培養(yǎng)瓶運輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上，裝滿培養(yǎng)液，只留紐扣大小的氣泡，瓶口用封口膜封好，標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時間/培養(yǎng)基類型，瓶子固定運輸。 2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài)，3-5天反饋細(xì)胞污染情況，5-7天反饋支原體污染情況。 3. 細(xì)胞詳細(xì)信息（名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等，如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息）	常溫	常溫
質(zhì)粒	1.純度高，無內(nèi)毒素，無蛋白質(zhì)，基因組DNA/RNA污染，質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間 2.濃度不低于0.5μg/μl，總量大于100μg，無內(nèi)毒素處理 3. 載體詳細(xì)信息，包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記	-20℃	冰袋
病毒	1.慢病毒：滴度不低于110⁸TU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時間，且沒有反復(fù)凍融 2.腺病毒：滴度不低于110⁹PFU/ml，體積約200μl，標(biāo)明制備時間，且沒有反復(fù)凍融 3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類，最好需要提供病毒載體圖譜；	-80℃	干冰

細(xì)胞交付標(biāo)準(zhǔn).jpg