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免疫組化/IHC實驗操作步驟由普拉特澤生物旗下科研培訓品牌——春風學院為大家總結分享。普拉特澤病理實驗平臺承接免疫組化/IHC幾百例，動植物各部位切片都有實操的經驗，在廣大科研小白的技術咨詢中我們終于總結了這篇免疫組化的注意事項出來供大家參考學習。

1、切片固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。對干冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍好，但對干不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。有時候商品化的抗體會有比較適合的固定液，使用前請注意查看說明書。

2、組織脫水，透明：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整

3、切片時展片：有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當?shù)卦谒屑尤霂椎我掖肌?/span>

4、烤片：60℃30分鐘或37℃過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。

5、蠟塊及切片的保存：最好在4℃保存

6、脫片問題：多聚賴氨酸為目前免疫組化染色工作中最常用的一種防脫片劑，6ml的多聚賴氨酸溶液可按1:10稀釋成60ml的工作液，適合于需要酶消化，微波，高溫高壓的防脫片處理。7、滅活內源性酶：HRP系統(tǒng):3%雙氧水滅活;AP系統(tǒng):3%HAc滅活

7、暴霞抗原：對于石蠟切片的免疫組化實驗時，必須采用高溫加熱抗原修復，這將有助于暴露抗原決定簇，從而增加免疫組化染色的強度(不同抗體的最佳修復液請參閱抗體說明書)。對于不同的組織，不同的抗原，不同的抗體，所采用的方法應不一樣，可進行熱修復、胰酶消化、既不修復也不消化。膠原還可以用胃蛋白酶消化等。

8、封閉：在山羊血清封閉，非特異性染色仍然較強時，可延長封閉時間或用濃縮血清封閉。

9、抗體稀釋：應遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”的原則，對于PBS稀釋的抗體一定要當天使用。

10、背景高：在抗體濃度、反應時間、反應溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含1%Tween20的PBS洗，特別是在顯色之前要多洗。

11、返藍：在蘇木精復染后，可用堿性緩沖液(如PBS)或Na2HPOA的飽和溶液

返藍。

12、顯色：一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。

13、在整個操作過程中，切片千萬不能干燥，否則會有非特異性染色。

好啦，那免疫組化/IHC的注意事項咱們就總結到這里啦，想更進一步學習免疫組化的技術可以點擊《免疫組化/IHC 理論+實操》跟著視頻學習文獻與操作。如果有同學需要免疫組化代做與外包的同學歡迎留言，認準普拉特澤哦。

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