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今天普拉特澤生物跟大家一起學習的是科研病理檢測和臨床實驗室檢查當中非常重要的技術——免疫組化/IHC操作步驟，文末附有免疫組化理論與實驗操作的視頻教程，大家可以自行學習。普拉特澤生物——病理實驗平臺專業(yè)承接免疫組化/IHC實驗服務，為廣大科研工作者或者科研小白提供專業(yè)可靠的幫助。

上文的免疫組化介紹中咱們講到了，在預測免疫組化在良惡性腫瘤的組織細胞學起源、判別轉移癌的起源部位、某些病理的亞型分類、腫瘤個體化治療、腫瘤的預后判斷都有一定的指導意義，那么這么重要的實驗，步驟是不是很難呢，來看看吧~

一、免疫組化實驗器材準備

生化培養(yǎng)箱、微波爐、生物組織攤烤機、冰箱、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、無水乙醇、雙氧水、中性樹膠、二甲苯、蘇木素、PBS緩沖粉、檸檬酸緩沖液、鼠兔通用試劑盒、顯色試劑盒

二、免疫組化實驗原理

抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及相對定量。

三、免疫組化實驗步驟

1、60℃烤片30~60 min；

2、切片脫蠟水化：先將切片置于二甲苯中10 min，2次。然后依次在100%，95%，85%和75%乙醇，每級放置5-10 min。再用蒸餾水浸洗5 min；

3、加入3%H2O2，室溫10 分鐘以滅活內(nèi)源性酶。PBS沖洗3 min x 3次；

4、熱修復抗原：將切片浸入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）,微波爐高火加熱8min后拿出，冷卻至室溫。冷卻后0.01M PBS（pH7.2~7.6）洗滌3 min x 3次；

5、血清封閉：切片滴加5%羊血清放入濕盒中，室溫20min。PBS洗滌3min×3次；

6、孵育一抗：滴加適當稀釋的一抗，對照組滴加等量PBS，4℃冰箱過夜；

7、孵育二抗：將載玻片從冰箱中取出，37℃溫箱復溫30min；用PBS沖洗5 min x 3次；滴加50~100 μL二抗，37℃溫箱孵育30 min；PBS沖洗5 min x 3次；

8、標記：滴加HRP標記鏈霉親和素，37℃溫箱孵育20 min；

9、DAB顯色：將片子從溫箱中取出，PBS沖洗5 min x 3次；滴加預制好的顯色劑DAB工作液50~100 μL，室溫孵育1-5 min，鏡下控制反應時間；

10、復染：將顯色后的片子蒸餾水洗滌，浸泡于蘇木素中復染1-3 min，蒸餾水沖洗，PBS返藍；

11、脫水：各級酒精（60-100%）脫水，每級5 min；

12、透明：取出后置于二甲苯10 min，2次；

13、封片：中性樹膠封片、顯微鏡觀察。

好了，免疫組化的完整實驗步驟就到這里了！想更深了解免疫組化的同學可以點擊《免疫組化理論+實操》視頻學習，需要免疫組化實驗外包的同學歡迎留言，我們會第一時間給到咨詢回復。

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