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細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)【細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包】

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)由普拉特澤生物技術(shù)為大家總結(jié)分享。普拉特澤生物——細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)承接細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)多例，總結(jié)了大量細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)操作的技巧與方法。

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是檢測細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)中一種性價(jià)比較高的體外研究方法。其基本原理：當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，這個(gè)區(qū)域稱之為“劃痕”，劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。這種過程類似體外傷口愈合過程，因此又稱之為傷口愈合實(shí)驗(yàn)，可以用來觀察外源性因素對細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)的影響，如藥物、響應(yīng)刺激、基因等。

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的操作雖然過程簡單快速，但想得到比較理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也要注意很多實(shí)驗(yàn)樣本和操作的細(xì)節(jié)，今天小編就來分享一些我們細(xì)胞平臺(tái)的技術(shù)操作時(shí)的各種注意事項(xiàng)，一起學(xué)習(xí)：

1、細(xì)胞的選?。和ǔＳ郎募?xì)胞系和原代細(xì)胞常用作這方面的模型，如角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。避免選取生長特別緩慢的、貼壁十分不牢固的或者堆積生長的細(xì)胞。

2、細(xì)胞培養(yǎng)的密度；劃痕實(shí)驗(yàn)一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合，但是每種細(xì)胞的生長速度會(huì)不一樣，所以需要按照細(xì)胞的生長特性調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間，細(xì)胞鋪滿孔底時(shí)劃痕的效果會(huì)比較好，建議是100%的鋪滿。

3、細(xì)胞培養(yǎng)方式：細(xì)胞培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)意指細(xì)胞遷移而不是細(xì)胞增殖，因此需要將細(xì)胞增殖的影響降到最低。當(dāng)然，一定程度上無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響，但由于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞的負(fù)面影響，細(xì)胞遷移的速度也會(huì)慢很多。培養(yǎng)環(huán)境要求37 ℃ 5% CO 2的培養(yǎng)箱，選取合適的時(shí)間點(diǎn)取樣拍照。

4、鋪細(xì)胞最好使用 6 孔板，因?yàn)?6 孔板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕，而且因?yàn)橛?/span>5 條定位線，與劃痕相交，這樣就有 10 個(gè)可固定監(jiān)測點(diǎn)，不作重復(fù)，誤差也很小。

5、如果連續(xù)監(jiān)測 24 小時(shí)，你需要考慮到劃痕縮小是細(xì)胞遷移和細(xì)胞繁殖共同作用的結(jié)果，而不是單純的細(xì)胞遷移。如果你要單純的考慮細(xì)胞遷移，你可以先用絲裂霉素（1 μg/ml）處理一小時(shí)，抑制細(xì)胞的分裂，這樣你的結(jié)果就是細(xì)胞遷移的作用了。另外，使用無血清培養(yǎng)基也可以降低增殖對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

6、照片拍完之后，可以用 image J 來測量劃痕區(qū)域的像素定量比較細(xì)胞遷移的速度。

7、雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響，但是由于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié)，細(xì)胞遷移的速度也會(huì)慢很多。

8、用槍頭畫線時(shí)盡量垂直，以6孔板為例，一個(gè)孔可以畫6條線

9、畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細(xì)胞

10、注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基，因?yàn)椋簞澓酆笥脽o血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，意在說明在監(jiān)測的 24 小時(shí)內(nèi)，劃痕的縮小是細(xì)胞遷移作用的結(jié)果，所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到蕞低；但若細(xì)胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

11、（5）放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)?？砂?/span>0，10，12，15時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。

12、（6）統(tǒng)計(jì)方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計(jì)算細(xì)胞間距離的平均值。

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)作為研究細(xì)胞遷移能力的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，每一步都非常的重要，怎樣可以經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的把實(shí)驗(yàn)做完而得到一份高質(zhì)量的結(jié)果，小編就把技巧和注意事項(xiàng)分享給大家了，希望可以幫到您，您有細(xì)胞劃痕和各類細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包與代做的需求，請一定要認(rèn)準(zhǔn)普拉特澤生物！我們下期見！

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