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        細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)操作步驟由普拉特澤生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)為大家總結(jié)分享。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移的方法。普拉特澤生物——細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺專業(yè)承接細(xì)胞劃痕等細(xì)胞實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)，積累了大量的實(shí)操經(jīng)驗(yàn)。今天小編就跟大家分享，在實(shí)操錘煉打磨中出來的細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)Culture Insert方法和普通細(xì)胞劃痕的操作步驟，一起來看看吧~

        一、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)Culture Insert方法操作步驟

        1、準(zhǔn)備細(xì)胞，培養(yǎng)液，culture lnsert。

        2、如圖，將細(xì)胞接種于Dish中間的Insert，細(xì)胞長滿Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500μm寬度的劃痕。

        3、每隔4-6小時拍照記錄。

        4、根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

        二、常規(guī)細(xì)胞劃痕法操作步驟

        實(shí)驗(yàn)器材：細(xì)胞培養(yǎng)板、marker筆、直尺、微升槍頭、培養(yǎng)基、PBS

        1、培養(yǎng)板劃線

        首先使用 marker 筆在 6 孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔 0.5~1cm 一道，橫穿過孔。每孔至少穿過 5 條線。劃線時注意線不要太粗 。

        2、鋪細(xì)胞

        在孔中加入約 5×105 個細(xì)胞（不同的細(xì)胞數(shù)量有所不同，根據(jù)細(xì)胞的生長快慢調(diào)整），接種原則為過夜后融合率達(dá)到 100%。

        3、細(xì)胞劃線

        第二天用槍頭或者無菌牙簽，垂直與細(xì)胞平面，沿著頭一天劃在平板背面的線在細(xì)胞層上進(jìn)行劃痕(不同孔之間最好使用同一只槍頭或牙簽)。

        4、洗細(xì)胞

        劃痕完成后，使用無菌 PBS 洗細(xì)胞 3 次，洗去不貼壁的細(xì)胞，即劃線時劃線的細(xì)胞，是劃線后留下的間隙清晰可見，然后更換新鮮無血清培養(yǎng)基。

        5、細(xì)胞培養(yǎng)、觀察

        將細(xì)胞放入 37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。然后在適當(dāng)?shù)臅r間點(diǎn)，如 0，6，12，24h 取出細(xì)胞，顯微鏡線觀察并測量劃痕的寬度，并拍照(具體時間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。

        6、結(jié)果分析

        使用 Image J 軟件打開圖片后，隨機(jī)劃取 6 至8 條水平線，計(jì)算細(xì)胞間距離的均值。

        注意：保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的無菌性；選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞貼壁；采用無血清培養(yǎng)液

        好啦，那實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們就分享到這里啦！如果您還有關(guān)于細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)的操作問題需要咨詢或有細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)代做的需求，可以直接留言給客服，技術(shù)會第一時間回復(fù)到您的哦！