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什么是細(xì)胞劃痕實驗?【細(xì)胞實驗外包】

2022-08-30 14:20:30

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

  大家好,今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)一個新的實驗——細(xì)胞劃痕實驗。細(xì)胞劃痕實驗(WoundHealing是一種操作簡單,經(jīng)濟(jì)實惠的研究細(xì)胞遷移/腫痛侵襲的體外試驗方法。細(xì)胞劃痕實驗介紹由普拉特澤細(xì)胞實驗平臺分享,細(xì)胞平臺專門為科研工作者提供細(xì)胞劃痕實驗代做服務(wù),提供結(jié)果真實,技術(shù)高質(zhì)量的細(xì)胞實驗服務(wù)?,F(xiàn)在我們就來看看細(xì)胞劃痕實驗的原理和應(yīng)用流程吧!

  細(xì)胞劃痕實驗是測定細(xì)胞遷移運動與修復(fù)能力的常用方法,類似體外傷口愈合模型,故又稱傷口愈合法。細(xì)胞劃痕實驗的原理是,當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時,在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”俞臺,基本的步騾包括“劃痕”的制造,細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。

  細(xì)胞劃痕實驗的操作主要是:在體外將細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)皿或平板上,當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時,用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細(xì)胞,在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為"劃痕"。然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞,劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使"劃痕"愈合,每間隔一段時間(如間隔12小時),顯微鏡下拍照,記錄細(xì)胞向中央空白區(qū)遷移情況,以此判斷細(xì)胞的遷移能力。

        1、細(xì)胞接種

        2、細(xì)胞劃痕

        3、細(xì)胞遷移期間圖像拍照

        3、數(shù)據(jù)處理。

        那細(xì)胞劃痕實驗可以應(yīng)用在哪些方面呢?給大家介紹一個案例(文末附參考文獻(xiàn))。

        細(xì)胞劃痕實驗可用于硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細(xì)胞劃痕損傷修復(fù)中的作用研究

        1自動平臺上制造軟骨細(xì)胞劃痕模型。

        2、通過劃痕閉合情況,獲得CS促進(jìn)軟骨損傷修復(fù)的最佳濃度。

        3、研究硫酸軟骨素和地塞米松對軟骨細(xì)胞損傷修復(fù)的影響。

        研究方法:

        1、體外提取、培養(yǎng)原代SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)及II膠原免疫熒光染色方法進(jìn)行細(xì)胞鑒定。

        2、應(yīng)用自動平臺制造軟骨細(xì)胞劃痕模型。

        3實時監(jiān)測觀察軟骨細(xì)胞劃痕的閉合過程。

        4、應(yīng)用計數(shù)有劃痕處固定相等區(qū)域內(nèi)軟骨細(xì)胞數(shù)目,確定促進(jìn)軟骨細(xì)胞愈合的最佳硫酸軟骨素(CS)濃度。

        5、應(yīng)用live/dead kit staining方法觀察細(xì)胞存活率。

        6、應(yīng)用免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique)檢測單純劃痕組、CS組、地塞米松組、CS和地塞米松共同作用組對I型及II型膠原的表達(dá)情況。

        實驗結(jié)果:

        1、應(yīng)用自動平臺制造出8通道的劃痕,劃痕具有水平的起點、止點及相同的寬度。

        2、濃度為200μg/mlCS對于軟骨細(xì)胞劃痕愈合的促進(jìn)作用最大。

        3、兩種藥物共同作用時CS可減輕地塞米松對于軟骨細(xì)胞增殖的抑制作用,I型膠原表達(dá)量較單獨應(yīng)用地塞米松組減少,II型膠原表達(dá)量則增多。

        實驗結(jié)論:

        1、硫酸軟骨素對于軟骨細(xì)胞劃痕愈合具有促進(jìn)作用,且在濃度200μg/ml時作用效果最佳。

        2、硫酸軟骨素對于糖皮質(zhì)激素引起的軟骨損傷具有修復(fù)作用。如臨床應(yīng)用糖皮質(zhì)激素,可加用硫酸軟骨素保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨。

        好啦,那關(guān)于細(xì)胞劃痕實驗的簡單介紹我們就講到這里啦,有細(xì)胞實驗不懂的問題或者需要細(xì)胞實驗外可以留言,咱們會逐一聯(lián)系,詳細(xì)溝通的哦!

        【參考文獻(xiàn)】

        Culture of bovine articular chondrocytes in funnel-like collagen-PLGA hybrid sponges This work was presented at the International Union of Materials Research SocietiesInternational Conference in Asia)(Qingdao,China,Sep.2528 2010.[J].Hongxu Lu,Young-Gwang Ko,Naoki Kawazoe,Guoping Chen.Biomedical Materials.2011(4)

        殷貴鯤.硫酸軟骨素與地塞米松在自動化軟骨細(xì)胞劃痕損傷修復(fù)中的作用[D].大連醫(yī)科大學(xué),2014.



        

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