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        大家好，今天普拉特澤生物帶大家學(xué)習(xí)的是——酵母雙雜交實驗的注意事項。酵母雙雜是可以直接在細(xì)胞外檢測蛋白質(zhì)交互作用的方法，也是普拉特澤生物分子檢測平臺的常規(guī)實驗之一。普拉特澤分子檢測平臺專業(yè)代做酵母雙雜實驗，積累了大量的實操經(jīng)驗與理論，今天就把我們在實驗中總結(jié)的所有注意事項全部分享給大家！

        1、如果誘餌蛋白對酵母細(xì)胞是有毒的，該怎么辦？

        在某些情況下，在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)不好的菌珠可以在固體培養(yǎng)基上生長得很好。首先重懸克隆于1mL的SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于5個100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5mL0.5XYPDA刮下每塊板上的克隆，并收集到一管中，這樣就可以使用這個細(xì)胞重懸液進(jìn)行正常的雜交反應(yīng)。

        2、如果誘餌蛋白存在自激活，該如何處理？

        該蛋白很可能帶有完整的AD區(qū)和BD區(qū)，是個完整的轉(zhuǎn)錄因子，可以將轉(zhuǎn)錄因子基因分成兩部分分別進(jìn)行文庫篩選，然后重新檢測其是否自激活，但要注意切割也有可能破壞蛋白之間的相互作用。

        3、轉(zhuǎn)化效率太低怎么辦？

        1) 檢測感受態(tài)細(xì)胞效率，標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范。 2) 注意質(zhì)粒使用量，檢查儀器狀態(tài)。 3) 重新配制新鮮培養(yǎng)基，并做對照轉(zhuǎn)化。

        4、如果誘餌蛋白對酵母細(xì)胞是有毒的，該怎么辦？

        在某些情況下，在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)不好的菌珠可以在固體培養(yǎng)基上生長得很好。首先重懸克隆 1mL 的 SD/–Trp，接著將重懸液平鋪于 5 個 100-mm 的 SD/–Trp 平板，在 30下溫浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用 5mL 0.5X YPDA 刮下每塊板上的克隆，并收集到一管中，這樣就可以使用這個細(xì)胞重懸液進(jìn)行正常的雜交反應(yīng)。

        5、雜交效率不高，該如何處理？

        在雜交中，預(yù)轉(zhuǎn)化的誘餌細(xì)胞的數(shù)量可能不夠。當(dāng)對誘餌菌株進(jìn)行液體培養(yǎng)過夜時，應(yīng)挑選大的、新鮮的克隆進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過離心和重懸后，再使用血球計對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。密度應(yīng)該在 1 x 109/mL。 一個甚至兩個融合蛋白對酵母細(xì)胞有毒。你可以通過重組方法來減輕毒性，同時又能保證蛋白的相互作用。或者使用表達(dá)水平較低的載體。也可以在瓊脂平板或濾膜上進(jìn)行雜交。但同時必須作雜交對照實驗。

        好啦，那關(guān)于酵母雙雜實驗操作的注意事項我們就先總結(jié)到這里啦，如果您也對酵母雙雜技術(shù)感興趣，或者正準(zhǔn)備做酵母雙雜交實驗的話，可以同時根據(jù)本文和上篇的酵母雙雜操作步驟一起參考設(shè)計步驟和實驗。如果需要的酵母雙雜外包的話，可以直接給客服留言，普拉特澤生物當(dāng)仁不讓~