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彗星實(shí)驗(yàn)/單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)【附操作視頻】

大家好呀，今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是彗星實(shí)驗(yàn)（單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)）操作時(shí)的注意事項(xiàng)，文末附上彗星實(shí)驗(yàn)理論操作視頻教程供大家學(xué)習(xí)。彗星實(shí)驗(yàn)是一種在單細(xì)胞水平檢測DNA 損傷程度的方法，作為普拉特澤生物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)，我們承接的彗星實(shí)驗(yàn)外包積累了超多種類細(xì)胞樣本的案例，歡迎大家留言咨詢領(lǐng)取案例。

那么話不多說，現(xiàn)在我們就來看看彗星實(shí)驗(yàn)的操作中有哪些注意事項(xiàng)吧！

1、細(xì)胞一定要消化成單個(gè)的，如果待測的細(xì)胞是懸浮生長的，或者形狀是圓形的，可以直接用細(xì)胞刮收細(xì)胞做，如果細(xì)胞是非圓形的，例如成纖維細(xì)胞等，一定要用胰酶消化，使之成圓形，然后才可做實(shí)驗(yàn)。很多做彗星實(shí)驗(yàn)總是出不來結(jié)果的，可以考慮下是否是這方面的原因。

2、細(xì)胞裂解：裂解條件也是一個(gè)關(guān)鍵變量，可能會(huì)干擾特定類型的DNA修飾(某些DNA烷基化和堿基內(nèi)收)導(dǎo)致的鏈斷裂。因此，建議在實(shí)驗(yàn)中對(duì)所有玻片的裂解條件盡可能保持恒定。準(zhǔn)備好后，應(yīng)在約2-8攝氏度的弱光條件下(如黃光(或防光)，將載玻片浸入冷凍溶解液中至少1小時(shí)(或過夜)，以避免暴露在可能含有紫外線成分的白光下。在此潛伏期之后，在堿液展開步驟之前，應(yīng)沖洗載玻片以除去殘留的洗滌劑和鹽。這可以用純凈水、中和緩沖液或磷酸鹽緩沖液來完成。

3、玻片準(zhǔn)備：單細(xì)胞懸液制備后，應(yīng)盡快(最好在1小時(shí)內(nèi))制備載玻片，但動(dòng)物死亡與載玻片制備之間的溫度和時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格控制，并在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行驗(yàn)證。

4、電泳時(shí)，電流與電壓強(qiáng)度在每次實(shí)驗(yàn)時(shí)要恒定，這樣出來的慧尾才有分析價(jià)值，將載玻片隨機(jī)放置在含有足夠電泳溶液的潛電泳裝置的平臺(tái)上，使載玻片表面完全覆蓋(每次覆蓋的深度也應(yīng)一致)。

5、掉膠的問題：蓋玻片最好兩面都涂上剝離硅烷(挺便宜的一大瓶，但是有毒)，這樣會(huì)好很多。

6、使用組織進(jìn)行彗星試驗(yàn)時(shí)，需注意細(xì)胞制備需全程在冰上進(jìn)行，且保證在1 h內(nèi)完成鋪片。

7、電泳膠使用時(shí)需提前水浴融化，禁用微波，清洗玻片時(shí)注意不要直接將液體傾倒至膠面，防止脫膠。

8、測量方法：彗星應(yīng)該使用自動(dòng)化或半自動(dòng)化的圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量評(píng)分。用合適的熒光染色劑對(duì)載玻片進(jìn)行染色，并在配備有超熒光和適當(dāng)檢測器的顯微鏡或數(shù)碼相機(jī)上進(jìn)行適當(dāng)放大(如200x)的測量。

好啦，那彗星實(shí)驗(yàn)（單細(xì)胞凝膠電泳）操作的注意事項(xiàng)咱們就講完啦，視頻教程點(diǎn)擊《彗星實(shí)驗(yàn) 理論+實(shí)操》，如果您也想學(xué)習(xí)彗星實(shí)驗(yàn)或者對(duì)彗星實(shí)驗(yàn)感興趣有不同的意見和想法，歡迎留言交流哦，下篇跟大家一起盤一盤，彗星實(shí)驗(yàn)中的常見問題,,我們下期見~

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