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大家好！今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是DNA提取的實(shí)驗(yàn)步驟。DNA全稱是脫氧核糖核酸，是生物細(xì)胞內(nèi)含有的四種生物大分子之一核酸的一種。普拉特澤生物分子檢測平臺為大家提供各種分子檢測外包實(shí)驗(yàn)，積累了大量實(shí)操經(jīng)驗(yàn)，本文就跟大家分享分子生物學(xué)研究的主要對象——動物組織DNA的提取步驟。

DNA 是遺傳信息的載體，是分子生物學(xué)研究的主要對象，為了進(jìn)行測序、雜交、基因表達(dá)、文庫構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)，獲得高分子量和高純度的基因組 DNA是非常重要的前提，因此基因組 DNA 的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中最重要、最基本的操作之一。

一、動物組織DNA提取設(shè)備準(zhǔn)備

1、材料：動物組織

2、試劑：TIANGEN 血液/細(xì)胞/組織基因組 DNA 提取試劑盒，無水乙醇等

3、設(shè)備：離心機(jī)，微量移液器等

二、動物組織DNA提取步驟

1、處理材料：取動物組織 10 mg，盡量切碎，加 200 μL 緩沖液 GA，振蕩至徹底懸浮。

2、加入 20 μL 蛋白酶 K 溶液，混勻后 56℃水浴，直至組織溶解（不同組織裂解時(shí)間不同，通常需 1-3 小時(shí)即可完成）。簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進(jìn)行下一步驟。

3、加入 200 μL 緩沖液 GB，充分顛倒混勻，70℃放置 10 分鐘，溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。（溶解 DNA）

注意：加入緩沖液 GB 時(shí)可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃放置時(shí)會消失，不會影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取出的 DNA不純。

4、加入 200 μL無水乙醇，充分振蕩混勻 15 s，此時(shí)可能出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。（沉淀 DNA）

5、將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱 CB3 中，吸附柱放入收集管中，12,000rpm（～13,400×g）離心 30s，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 放回收集管中。（吸附沉淀）

6、向吸附柱 CB3 中加入 500 μL緩沖液 GD （使用前先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm（～13,400×g）離心 30s，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 放回收集管中。

7、向吸附柱CB3 中加入700 μL漂洗液PW （使用前先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm（～13,400×g）離心 30 s，倒掉廢液，將吸附柱 CB3 放回收集管中。

8、向吸附柱 CB3 中加入 500 μL漂洗液 PW，12,000 rpm（～13,400×g）離心 30s，倒掉廢液。（6、7、8 為漂洗）

9、將吸附柱 CB3 放回收集管中，12,000 rpm（～13,400×g）離心 2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CB3 置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的 PCR 等實(shí)驗(yàn)。

10、將吸附柱 CB3 轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50-200 μL洗脫緩沖液 TE，室溫放置 2-5 min，12,000 rpm（～13,400L×g）離心 2 min，將溶液收集到離心管中。（溶解洗脫 DNA）

注意：采用硅基質(zhì)膜吸附的 DNA，可將 DNA 在低鹽高 pH 值條件下洗脫下來。pH 值在7.0-8.5 之間洗脫效率較高，pH 值低于7.0 則洗脫效率很低。

洗脫緩沖液體積不應(yīng)該少于 50μL，體積過小影響回收效率。為增加基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱 CB3 中，室溫放置2 min， 12,000 rpm（～13,400×g）離心 2 min。DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防止 DNA 降解。

好啦，那關(guān)于動物組織樣本中的DNA提取步驟咱們就說到這里啦，如果您也對分子實(shí)驗(yàn)感興趣的話可以直接留言，跟普拉特澤生物的技術(shù)一起討論動物組織樣本DNA樣本最優(yōu)的提取步驟~

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