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細胞增殖檢測方法介紹之MTT法和CCK8法——MTT/CCK8細胞增殖檢測外包

細胞增殖檢測常用方法MTT法和CCK8法詳細介紹由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享。普拉特澤旗下的細胞實驗平臺根據(jù)多年來承接的細胞增殖檢測外包實驗經(jīng)驗，給大家介紹兩個我們在檢測細胞增殖時時最常用的實驗方法——MTT法和CCK8法，同學們打起精神來，這兩種檢測方法應(yīng)用廣泛值得學習哦。如果有需要用MTT和CCK8法檢測細胞增殖實驗外包的需求，請關(guān)注我們哦。

首先我們來看看細胞增殖檢測中的MTT法：
MTT法檢測原理：MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。

局限性：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結(jié)果的準確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。

MTT檢測法注意事項：

1、MTT法只能用來檢測細胞相對數(shù)和相對活力，但不能測定細胞絕對數(shù)。在用酶標儀檢測結(jié)果的時候，為了保證實驗結(jié)果的線性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范圍內(nèi)。

2、MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后4℃避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/mL保存在-20℃長期保存，避免反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里，用的時候現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加，尤其當MTT變?yōu)榛揖G色時就絕對不能再用了。

3、MTT有致癌性，用的時候小心,有條件最好帶那種透明的薄膜手套.配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感；往96孔板加時不避光也沒有關(guān)系，畢竟時間較短，或者可以把操作臺上的照明燈關(guān)掉。

4、配制MTT時用PBS溶解,也有人用生理鹽水配，60℃水浴助溶。

那現(xiàn)在我們再來來看看細胞增殖檢測中的CCK-8法：

CCK-8法檢測原理：CCK-8檢測實際是基于CCK-8試劑盒的細胞檢測方法。原理和MTT相似，都是由于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜，不同之處在于CCK-8法生成的藍紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）是水溶的。故較MTT法減少了吸出培養(yǎng)液在加入有機溶劑溶解這一步，也算是MTT法的優(yōu)化。相對與MTT ,CCK8試劑盒使用方便，即開即用；減少了實驗過程重復(fù)性；減小了對細胞的毒性。另一方面，較于MTT法實驗經(jīng)費也會貴不少。

CCK-8法注意事項：

1. CCK-8的培養(yǎng)時間一般為1-4小時，但在培養(yǎng)30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度，根據(jù)細胞種類而定，需要摸索條件，CCK-8的最佳反應(yīng)時間以具體顯色的最佳時間為準。

2. 使用 96 孔板進行檢測時，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)問題。一方面，由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

3. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑 (例如一些抗氧化劑) 會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。用酶標儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。

4. 加入藥物中如含有金屬，對CCK-8顯色有影響。終濃度為1 mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應(yīng)，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。

5. 培養(yǎng)基中的酚紅不會影響實驗結(jié)果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

6. 本產(chǎn)品可以檢測，但不能檢測酵母細胞。向 100 μL 培養(yǎng)液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培養(yǎng) 1-4 小時或過夜。

7. CCK-8 試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內(nèi)的脫氫酶持續(xù)反應(yīng)使溶液顏色不斷加深，OD 值不斷增加 (注: 活細胞內(nèi)的脫氫酶是持續(xù)產(chǎn)生的) 。

8. 要測定細胞的具體數(shù)量，建議同時做標準曲線。

9. 建議采用多通道移液器，以減小平行孔間的差異。

細胞增殖檢測CCK8法實驗結(jié)果

好啦，那這兩個關(guān)于細胞增殖檢測的實驗方法同學們看懂了嗎？MTT法和CCK8法更想學哪個呢？小編的建議是成年人的世界不需要選擇，全都要！如果您不只有學習的需求，還有細胞增殖實驗外包的需求，請認準普拉特澤細胞實驗平臺，您科研路上一個靠譜兒的大兄弟！

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