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        Question：做COIP沒有想要的目的條帶怎么辦？（普拉特澤生物提供長期穩(wěn)定的COIP代做外包服務(wù)）

        答：COIP實(shí)驗(yàn)沒有目的條帶的原因很多，不同原因?qū)е碌臎]有目的條帶處理方法不一樣，我們來一個(gè)一個(gè)看：

        1、有可能是樣品被蛋白酶降解，對應(yīng)的策略是需要添加蛋白酶抑制劑，且所有操作保持4℃以下冰上操作并防止凍融。

        2、有可能是抗體濃度太低導(dǎo)致條帶較淺，則需要調(diào)整IP或IB抗體濃度，必要時(shí)設(shè)立濃度梯度，摸索最佳濃度。

        3、抗體親合力太低，選用適合于IP或IB的相應(yīng)抗體；

        4、有可能IP抗體未與瓊脂糖/磁珠結(jié)合。此種情況則需要選選用適合于IP的相應(yīng)珠子，正確保存防止變質(zhì)或干燥。

        5、若Tag未暴露在融合蛋白構(gòu)象的表面，則需要改變tag融合表達(dá)部位。

        6、裂解液鹽堿度太高，則需要改用低鹽堿度裂解液。

        7、目的蛋白在樣本中表達(dá)量低或者不表達(dá)，則需首先對目的蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測，或者加大IP中加入的蛋白裂解物并進(jìn)行預(yù)處理。

        8、目的蛋白未被洗脫可能導(dǎo)致沒有條帶，須保證使用合適的洗脫液，保證洗脫液的強(qiáng)度和pH值合適。

        9、抗體選擇不當(dāng)或者不工作，則須利用WB對抗體進(jìn)行驗(yàn)證。

        分子互做技術(shù)咨詢：18570028002

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