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一張圖搞懂qPCR實驗中CT值的定義

2026-02-10 17:14:15

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺


先看懂qPCR擴增曲線的一生

這是 qPCR 擴增的全過程,分 3 個階段:

1. 起始期:剛開始循環(huán),DNA 剛復制,熒光信號弱,和背景噪音差不多,儀器檢測不到明顯變化;

2. 指數(shù)期DNA 片段以 2?的速度快速復制,熒光信號呈指數(shù)增長,這個階段的擴增效率最穩(wěn)定,是最能反映模板初始量的階段;

3. 平臺期:原料耗盡,擴增減速,熒光信號不再增加,曲線趨于平緩。

2

CT 值

CT 值:“熒光達標” 時的循環(huán)數(shù)。上圖中那條灰色的閾值線(Threshold),是儀器設定的可檢測熒光信號閾值。CT 值(Cycle Threshold),就是熒光信號剛好跨過這條門檻時,PCR 已經跑了多少個循環(huán)。

綠色曲線:在更早的循環(huán)就達標 → CT 值更?。ㄕf明它的初始量多,只需要跑幾圈就到閾值線)

 紅色曲線:需要更多循環(huán)才能達標 → CT 值更大(說明它初始含量低,需要多跑幾圈才能到閾值線)。

3

CT 越小,初始基因越多

qPCR 的定量原理很直接:如果樣品里的目標基因初始含量越高,DNA 復制到 “能被檢測到” 的速度就越快,對應的 CT 值就越?。环粗跏己吭降?,CT 值就越大。

比如

 過表達(OE)組的 CT 值 < 對照組 → 說明目標基因表達量更高

敲低(KD)組的 CT 值 > 對照組 → 說明目標基因表達量更低。

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