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文章開始前，大家可以先思考一下：1 如果你的樣本是細(xì)胞株/細(xì)胞系，你做的實驗重復(fù)是算技術(shù)性重復(fù)還是生物學(xué)重復(fù)？2 生物學(xué)重復(fù)的難度更高還是技術(shù)性重復(fù)的難度更高？

我們曾經(jīng)多次強調(diào)過，為了確保精確度和準(zhǔn)確度、盡可能避免玄學(xué)和誤差，每個檢測項都應(yīng)該實現(xiàn)三次生物學(xué)重復(fù)和三次技術(shù)重復(fù)。

雖然實際實驗中很可能沒有這個條件，但了解通過重復(fù)避免誤差的原理有助于優(yōu)化現(xiàn)有實驗方案。
普拉特澤生物為廣大生命科學(xué)研究人員提供wb實驗和qpcr檢測，可根據(jù)實方案的要求選擇不同的檢測方法

1 概念

生物學(xué)重復(fù)：在同樣的實驗條件下取不同生物來源的樣本。如同一培養(yǎng)條件下培養(yǎng)三組不同來源的原代細(xì)胞或動物，從每一組中使用同樣的操作方法取等量的細(xì)胞、組織樣本進(jìn)行實驗，就是三組生物學(xué)重復(fù)。一句話概括就是用不同的生物個體或獨立來源的樣本重復(fù)你的實驗。

生物學(xué)重復(fù)的目的是為了觀察實驗結(jié)果是否在生物個體間具有普遍性，排除個體差異或生物本身的自然變異對結(jié)果的影響。

技術(shù)重復(fù)：以同樣的實驗條件對同一樣本進(jìn)行多次測量或重復(fù)處理。如同一樣本以同樣方法測量三次吸光度。

技術(shù)重復(fù)的目的是為了確認(rèn)實驗操作（如人、儀器、步驟）的穩(wěn)定性和精確性，排除人為操作、機器檢測上的技術(shù)誤差。

以最常做的實驗WB和qPCR為例，我們將分別說明如何在有限的樣本數(shù)量內(nèi)實現(xiàn)生物學(xué)重復(fù)和技術(shù)重復(fù)。

2 WB實驗

一塊膠上的泳道數(shù)量有限，每一個生物學(xué)樣本都在一塊膠上做三次技術(shù)重復(fù)，一方面不現(xiàn)實（孔位不夠）；另一方面所有樣本其實都在一個孔內(nèi)同步反應(yīng)，無法充分暴露批次操作帶來的差異，而wb的技術(shù)誤差主要來自于蛋白提取、凝膠質(zhì)量、抗體孵育操作等其他環(huán)節(jié)引入的技術(shù)偏差。

同時，Western blot的核心目的是觀察樣本的生物學(xué)差異（例如藥物處理對蛋白表達(dá)的影響），而不僅僅是檢測實驗操作的準(zhǔn)確性。

相較于同一份樣本的多次測量，使用多份獨立生物學(xué)樣本（例如不同培養(yǎng)皿的細(xì)胞、不同動物個體）更能反映真實效應(yīng)。因此，在WB實驗中，一塊膠內(nèi)不做技術(shù)性重復(fù)，要做技術(shù)性重復(fù)，就用同一組樣本再跑一次膠。

以下是一個參考方案：

1. 對照組+實驗組（如不同實驗條件a/b/c），對照組占一個孔，a/b/c各占一個孔，合并起來為一組（如此例中一共有4個孔）；

2. 準(zhǔn)備至少3份這樣的實驗組樣本a/b/c，每一實驗組單獨實驗，合計做了3次；

3. 在每一組實驗內(nèi)，不再進(jìn)行技術(shù)重復(fù)，即任何樣本在一次WB實驗時都不需要再設(shè)置復(fù)孔。

3 qPCR實驗

對于qPCR，讀數(shù)基于96孔板，技術(shù)性檢測就很好辦了，96孔板的通量足夠高，生物學(xué)重復(fù)和技術(shù)性重復(fù)可以兼顧。

同時，因為96孔板每一個孔的反應(yīng)都是獨立進(jìn)行的，它并不像western blot的sds-page膠那樣所有孔都在一塊膠上反應(yīng)，因此技術(shù)性重復(fù)和生物學(xué)重復(fù)在同一塊板內(nèi)一次進(jìn)行是能OK的。因為它的反應(yīng)過程遵循了“孔位獨立反應(yīng)，結(jié)果互不干擾”這一點。

以下是一個參考方案：

1. 對照組+實驗組（如不同實驗條件a/b/c），對照組占一個孔，a/b/c各占一個孔，合并起來為一組（如此例中一共有4個孔）；

2. 由于一塊板有足夠多的孔，可以將多個組放在一塊板同時反應(yīng)，保證至少3次生物學(xué)重復(fù)；

3. 一個樣本的技術(shù)性重復(fù)另外做2個，也可以放在一塊板里同時反應(yīng)；

4. 也就是技術(shù)性重復(fù)3次，生物學(xué)重復(fù)3次?；旧?6孔板肯定夠。

最后，回到文章最初的那兩個問題，大家可以在評論區(qū)分享一下你的看法。