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Southern blot印跡雜交實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題與注意事項(xiàng)【干貨】

大家好呀，今天給大家分享的是Southern Blot印跡雜交實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的一些常見(jiàn)問(wèn)題與注意事項(xiàng)，快點(diǎn)學(xué)起來(lái)吧。普拉特澤生物分子檢測(cè)平臺(tái)轉(zhuǎn)為科研人提供Southern Blot實(shí)驗(yàn)代做與技術(shù)咨詢(xún)服務(wù)，用最專(zhuān)業(yè)的科研硬實(shí)力做您科研科路上的摯友

關(guān)于Southern Blot實(shí)驗(yàn)操作別人常問(wèn)的問(wèn)題主要是兩個(gè)：

1、針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)材料，Southern雜交實(shí)驗(yàn)難度有差異么？答：不同的實(shí)驗(yàn)材料，在進(jìn)行試驗(yàn)過(guò)程中難度差異很大，例如玉米、小麥、葡萄的Southern雜交檢測(cè)難度要比普通的材料要大。

(1)、物種本身的基因組較大（例如小麥），檢測(cè)操作難度大

(2)、材料本身含有高糖多酚（例如葡萄）嚴(yán)重影響酶切操作

(3)、物種品系復(fù)雜（例如玉米），在基因組信息研究層面還不透徹。

2、核酸質(zhì)量對(duì)Southern雜交實(shí)驗(yàn)的影響

答：核酸質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響是直接的，既要求客戶(hù)提供的總量足夠——實(shí)驗(yàn)消耗（上樣量），又要求保證質(zhì)量——按要求準(zhǔn)備材料。上樣量指的是基因組DNA酶切消化后，回收后的DNA片段的量。根據(jù)不同物種的基因組大小不同，上樣量也有所區(qū)別?；蚪M越大，上樣量越多。例如，擬南芥大概需要3ug ，酵母3ug，人8ug，小麥15ug。酶切消化之后不能直接上樣，需要回收純化?；厥諘?huì)有損失，最多能損失一半，所以需要客戶(hù)提供足夠量的樣品，一般要求至少20 ug的基因組DNA。（以上上樣量均為一個(gè)泳道）DNA 樣品一般對(duì) OD 值和濃度有如下要求：OD260/280=1.8～2.0，OD260/230＞2.0，濃度≥100 ng/ul 。同時(shí)，需要對(duì) DNA 樣品進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果顯示該 DNA 樣品無(wú)蛋白質(zhì)和 RNA 等物質(zhì)污染，無(wú)降解彌散，條帶清晰。

那么實(shí)驗(yàn)的操作過(guò)程中我們要注意的是Northern雜交和Southern雜交之間最大的區(qū)別在于一開(kāi)始的凝膠分離步驟。因?yàn)閱捂?/span>RNA容易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，因此RNA樣品在電泳時(shí)必須在變性條件下才能獲得好的分離效果?？?/span>RNA和poly(A+) RNA都能用于Northern Blot,不過(guò)總RNA效果會(huì)差點(diǎn)因?yàn)榉翘禺愋噪s交會(huì)使背景變深。Northern Blot能夠檢測(cè)到約5 pg RNA量，而通常mRNA量只占總RNA的0.5%。因此要得到大于5 pg mRNA，起始總RNA量要大于100ng。

那么關(guān)于southern blot實(shí)驗(yàn)操作中的注意事項(xiàng)和常見(jiàn)問(wèn)題咱們就講完啦，還有不懂的歡迎電話留言咨詢(xún)，需要southern blot實(shí)驗(yàn)外包的服務(wù)普拉特澤也是當(dāng)仁不讓的哦！

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