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   雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)常見問題與解答由普拉特澤生物分子檢測平臺(tái)給大家總結(jié)分享，文尾附上視頻教程供大家學(xué)習(xí)。普拉特澤生物更承接包括線下雙熒光素酶報(bào)告基因檢測等各類生物實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，旗下科研培訓(xùn)品牌《春風(fēng)學(xué)院》為廣大科研人員提供線上下6大國自然專題精講、15項(xiàng)常用實(shí)驗(yàn)技能講解與實(shí)操培訓(xùn)課程，徹底提高您的實(shí)驗(yàn)操作技能。

   好了話不多說我們來看看天才同學(xué)們的提問吧：

   Question1：什么是雙熒光素酶報(bào)告基因測試系統(tǒng)（DLR）?

   A：DLR測試系統(tǒng)靈敏，方便，在一個(gè)系統(tǒng)中用于測量兩個(gè)單獨(dú)的熒光素酶報(bào)告基因， 螢火蟲熒光素酶及海洋海腎熒光素酶 (Renilla reniformis)，DLR測試系統(tǒng)可用于細(xì)胞裂解物及無細(xì)胞的翻譯系統(tǒng)。

   Question2：用雙報(bào)告基因有何優(yōu)點(diǎn)?

   A：一般地說，實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因用于測試實(shí)驗(yàn)條件下基因的表達(dá)， 而另一個(gè)報(bào)告基因作為內(nèi)對照，以提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因測試的歸一化。將實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因的活力與內(nèi)對照報(bào)告基因的活力作歸一化可消除實(shí)驗(yàn)中不同測試間所固有的變化。 這些變化減弱實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度，其中包括培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目及活力的差異，細(xì)胞轉(zhuǎn)染及裂解的效率。海腎熒光素酶可用作對照報(bào)告基因及實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因。在雙熒光素酶報(bào)告基因測試中，將螢火蟲熒光素酶作為實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因，海腎熒光素酶作為對照報(bào)告基因。

   Question3：海腎熒光素酶與螢火蟲熒光素酶相比的相對活性如何?

   A：在ATP、鎂、氧存在時(shí)，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸(Renilla reniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。

   Question4：將兩個(gè)報(bào)告基因載體作共轉(zhuǎn)染應(yīng)用什么條件?

   A：（1）當(dāng)用雙熒光素酶報(bào)告基因測試系統(tǒng)來測量等重量的螢火蟲熒光素酶及海腎熒光素酶時(shí)，可觀察到它們釋放的光幾乎相等。黃火蟲熒光素酶的分子量為61 kD，而海腎熒光素酶的分子量為36 kD，當(dāng)測試等重量的兩個(gè)酶時(shí)，所測的海腎熒光素酶分子實(shí)際多69%。如以每摩爾為基礎(chǔ)，據(jù)實(shí)驗(yàn)確定，用雙熒光素酶報(bào)告基因試劑測試的瑩火蟲熒光素酶的熒光強(qiáng)度比海腎熒光素酶強(qiáng)大約53%。

   （2）共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒所含啟動(dòng)子間的反式效應(yīng)有可能會(huì)影響到報(bào)告基因的表達(dá)。

   （3）為體實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因及對照報(bào)告基因的基因表達(dá)相對獨(dú)立。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)轉(zhuǎn)染混和液中載體DNA的量及共轉(zhuǎn)染報(bào)告基因載體的比例需作優(yōu)化?？刹捎脤?shí)驗(yàn)載體與共轉(zhuǎn)染報(bào)告基因載體的組成比在10:1到50:1或更大的范圍，這有利于抑制啟動(dòng)子間的交互作用。有時(shí)為有利于實(shí)驗(yàn)，共轉(zhuǎn)染混和液中的實(shí)驗(yàn)載體應(yīng)選擇為少量部分。

   Question5：需用熒光測試儀對雙熒光素酶報(bào)告基因測試系統(tǒng)的熒光素酶作測定嗎?

   A：作DLR測試時(shí)應(yīng)使用熒光測試儀，液閃儀的靈敏度相比太低，不易獲得可重復(fù)的結(jié)果。

   Question6：被動(dòng)裂解液能裂解培養(yǎng)的植物細(xì)胞嗎？它能裂解哺乳動(dòng)物組織所得的初級細(xì)胞嗎？

   A：被動(dòng)裂解液不能裂解植物細(xì)胞。它能裂解一些類型的哺乳初級細(xì)胞。一種細(xì)胞能否被它裂解需作測試。

   好了，好啦，關(guān)于雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)的常見問題與答疑我們就講完啦，還有不懂的同學(xué)歡迎隨時(shí)留言哦，需要視頻教程的同學(xué)請點(diǎn)擊：《雙熒光素酶原理+實(shí)操》