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周五好！今天普拉特澤跟大家一起來(lái)介紹一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)——酵母單雜交實(shí)驗(yàn)。酵母單雜交技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)和特定DNA序列相互作用的技術(shù)方法，普拉特澤生物分子檢測(cè)平臺(tái)為廣大科研工作者提供酵母單雜實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，今天就跟大家一起來(lái)看看酵母單雜交的簡(jiǎn)單介紹！

酵母單雜交技術(shù)最早是1993年由Li等從酵母雙雜交技術(shù)發(fā)展而來(lái)，通過(guò)對(duì)報(bào)告基因的表型檢測(cè)，分析DNA與蛋白之間的相互作用，以研究真核細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)調(diào)控。由于酵母單雜交方法檢測(cè)特定轉(zhuǎn)錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和可靠性，現(xiàn)已被廣泛用于克隆細(xì)胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的特定轉(zhuǎn)錄因子。

酵母單雜交的基本操作過(guò)程主要包括：

1、設(shè)計(jì)含目的基因(稱為誘餌)和下游報(bào)告基因的質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞。

2、將文庫(kù)蛋白的編碼基因片段與GAL4轉(zhuǎn)錄激活域融合表達(dá)的cDNA文庫(kù)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化人同一酵母中。

3、若文庫(kù)蛋白與目的基因相互作用，可通過(guò)報(bào)告基因的表達(dá)將文庫(kù)蛋白的編碼基因篩選出來(lái)。在這里作為誘餌的目的基因就是啟動(dòng)子DNA片段，文庫(kù)基因所編碼的蛋白就是啟動(dòng)子基因結(jié)合蛋白。

酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據(jù)DNA結(jié)合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結(jié)合調(diào)控報(bào)告基因表達(dá)的原理，克隆與靶元件特異結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子基因(cDNA)的有效方法。其理論基礎(chǔ)是：許多真核生物的轉(zhuǎn)錄激活子由物理和功能上獨(dú)立的DNA結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉(zhuǎn)錄激活區(qū)(Activation domain AD)組成，因此可構(gòu)建各種基因與AD的融合表達(dá)載體，在酵母中表達(dá)為融合蛋白時(shí)，根據(jù)報(bào)道基因的表達(dá)情況，便能篩選出與靶元件有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。理論上，在單雜交檢測(cè)中，任何靶元件都可被用于篩選一種與之有特異結(jié)合區(qū)域的蛋白。

那么酵母雙雜技術(shù)在現(xiàn)實(shí)驗(yàn)中有哪些用途呢？

1、迄今為止，應(yīng)用酵母單雜交體系已經(jīng)識(shí)別并驗(yàn)證了許多與目的DNA序列結(jié)合的蛋白質(zhì)，同時(shí)單雜交技術(shù)還被應(yīng)用于識(shí)別金屬反應(yīng)結(jié)合因子。正向與反向單雜交體系的結(jié)合，還可用于篩選阻礙DNA與蛋白質(zhì)相互作用的突變的單個(gè)核苷酸。

2、目前，在研究DNA—蛋白質(zhì)相互作用中，酵母單雜交體系主要有以下3種用途：①確定已知DNA—蛋白質(zhì)之間是否存在相互作用;②分離結(jié)合于目的順式調(diào)控元件或其他短DNA結(jié)合位點(diǎn)蛋白的新基因;③定位已經(jīng)證實(shí)的具有相互作用的DNA結(jié)合蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及準(zhǔn)確定位與DNA結(jié)合的核苷酸序列。

3、酵母單雜交是在酵母雙雜交的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的技術(shù)，酵母單雜交主要用于研究蛋白質(zhì)和DNA的相互作用，而酵母雙雜交主要是用于研究蛋白質(zhì)間的相互作用。

在實(shí)際的應(yīng)用中，酵母雙雜也有一些無(wú)法避免的缺點(diǎn)，如：

由于插入的靶元件與酵母內(nèi)源轉(zhuǎn)錄激活因子可能發(fā)生相互作用，或插入的靶元件不需要轉(zhuǎn)錄激活因子就可以激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄，因此往往產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。如果酵母表達(dá)的AD融合蛋白對(duì)細(xì)胞有毒性，或融合蛋白在宿主細(xì)胞內(nèi)不能穩(wěn)定地表達(dá)，或融合蛋白發(fā)生錯(cuò)誤折疊，或者不能定位于酵母細(xì)胞核內(nèi)，以及融合的Gal4AD封閉了蛋白質(zhì)上與DNA相互作用的位點(diǎn)，則都可能干擾AD融合蛋白結(jié)合于靶元件的能力，從而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

酵母單雜技術(shù)的簡(jiǎn)單介紹我們就講到這里啦，關(guān)于酵母雙雜的見解、原理、流程、應(yīng)用、缺點(diǎn)你都記住了嗎？沒記住沒關(guān)系，我們幫您做，如果有酵母單雜實(shí)驗(yàn)外包或代做的需求，請(qǐng)選擇為真實(shí)實(shí)驗(yàn)而生的普拉特澤~