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        大家好！今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是RIP、CHIP、CO-IP等實驗樣本取樣與準(zhǔn)備的各種注意事項，普拉特澤生物分子檢測中心承接免疫共沉淀等分子互做實驗幾百例，積累大量的實操經(jīng)驗，我們來一個個看：

        一、樣本準(zhǔn)備前注意事項

        1、取樣的代表性

        所采集的樣本應(yīng)該通過嚴(yán)格的細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)等相關(guān)鑒定，因為這關(guān)系 到實驗最終結(jié)果是否具有科學(xué)意義，所以客戶須根據(jù)實驗?zāi)康脑O(shè)計相關(guān)科學(xué)取樣 方案和取樣步驟。

        2、取樣的準(zhǔn)確性

        正常組織樣本中不能含有病變組織，而病理組織樣本中也不可以夾帶有正常組織。

        在條件允許的前提下，爭取做到實驗組與對照組的樣本在取材時間、部位、處理條件等方面盡可能保持一致，否則可能會影響實驗結(jié)果的重復(fù)性和可信度。代表性樣本的各種特征數(shù)據(jù)必須被準(zhǔn)確記錄，并按要求（低溫、迅速）采集、制 備、貯存、運輸進行實驗處理。

        3、取樣的重復(fù)性

        生物學(xué)重復(fù)的取樣應(yīng)盡量減少重復(fù)間樣品的差異。在條件允許的前提下，做到重復(fù)樣本在取材時間、部位、處理條件等方面盡可能保持一致，可以使用同一個體

        的作為重復(fù)的盡量選用同一個體，不能使用同一個體的應(yīng)保證父母本、雌雄（性別）、年齡相同，否則可能會影響實驗結(jié)果的重復(fù)性和可信度。

        4、取樣的及時性

        樣本質(zhì)量是影響實驗結(jié)果的最關(guān)鍵因素，因此用于研究的實驗樣本，在采集、貯存、運輸和制備的過程中盡可能地做到迅速，最大限度的縮短從樣本采集到實驗 的時間。

        5、取樣的低溫性

        所取樣本離體后，經(jīng)快速清洗和標(biāo)記等處理后，應(yīng)立即投入液氮中速凍至少 30 分鐘，之后保存于-80℃冰箱或者干冰中，確保在實驗操作前樣品始終處于-80℃，以避免蛋白的降解。

        二、RIP檢測樣本取樣方法

        1、組織、細(xì)胞、微生物等樣本準(zhǔn)備與保存方法

        （1）動物組織

        A. 取下新鮮組織，應(yīng)剔除結(jié)締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型；

        B. 迅速用預(yù)冷的 0.9％生理鹽水漂洗將組織表面的殘留血液沖洗干凈；

        C. 如果組織體積較大，盡量將組織切成長寬高均≤0.5cm 的小塊（即黃豆大小）；

        D. 將處理好的組織樣本混合均勻后保存于 10 ml 或更大體積的旋蓋凍存管中，準(zhǔn)確標(biāo)記；

        E. 迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存；

        F.運送方式：將凍存管置于 50ml 離心管中或密封性好的塑料袋中，干冰運輸。

        （2）植物組織

        A. 從植物體上，取下新鮮組織。大田或野外獲取的材料，取材后需將材料表面的灰塵或泥土沖洗干凈，吸干。

        B. 如果組織體積較大，應(yīng)盡量將組織剪切成小塊，然后將組織放入 10ml 或更大體積的凍存管中，或者使用錫箔紙包嚴(yán)后放入自封袋，準(zhǔn)確標(biāo)記；

        C. 迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存；

        （3）腫瘤組織

        A. 對腫瘤組織的取材，應(yīng)盡可能準(zhǔn)確地判定腫瘤和正常組織，如果有可能請根據(jù)冰凍切片報告的結(jié)果來判斷要進行研究的取材部位，腫瘤組織應(yīng)將周圍的正常組織切除干凈（正常組織也應(yīng)將周圍的腫瘤組織切除干凈）；

        B. 離體后請立即分割組織，約 2-3 mm 厚，然后將組織放入 2.0 mL 或更大體積旋蓋凍存管中；

        C. 迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存；

        D. 運送方式：將凍存管放置于 50ml 離心管中或密封性好的小塑料袋中，干冰運輸；

        （4）細(xì)胞樣品

        A.貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液，并用 PBS 緩沖液（無 Rnase 配制）清洗兩次，3,000 rpm/ min/ 4 ℃離心 5min，倒盡上清，準(zhǔn)確標(biāo)記；

        B.迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘，然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存；

        C. 運送方式：將凍存管放置于 50ml 離心管中或密封性好的小塑料袋中，干冰運輸；

        好啦，那關(guān)于RIP檢測的樣本準(zhǔn)備注意事項咱們就說到這里啦，如果您也正在準(zhǔn)備做RIP檢測的話可以參考文中RIP檢測樣本的注意事項，RIP檢測代做或外包的需求歡迎隨時留言咨詢普拉特澤生物~