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支原體培養(yǎng)法檢測支原體操作步驟由普拉特澤生物表達檢測平臺分享，培養(yǎng)法檢測支原體非常經典，準確率高，得到界內認可。普拉特澤生物承接的多例支原體檢測外包實驗中，有部分周期不緊急的實驗會選擇培養(yǎng)法。

培養(yǎng)法為最為經濟可靠的方法，但其實驗周期較長，所以常用來進行對懷疑細胞的最后甄別。常用于細胞及臨床治療細胞的支原體檢查。

（一）材料與設備

1. 精氨酸肉湯培養(yǎng)基按說明稱量粉劑，蒸餾水配制，高壓除菌（加20％胎牛血清）。

2. 支原體瓊脂培養(yǎng)基按說明稱量粉劑，蒸餾水配制，高壓除菌（加20％胎牛血清）。

3. 其他超凈工作臺、無菌吸管、試管架、培養(yǎng)試管／皿、37°C 培養(yǎng)箱。

（二）操作步驟

1. 樣品的儲存。樣品取材后，最好盡快進行檢測。樣品如在24h 以內進行支原體檢測，可儲存在2~8℃; 如果超過24h 樣品應放置于－20℃ 以下保存。-20℃保存的樣品，進行檢測時需重新加入到對照培養(yǎng)細胞中，培養(yǎng)72h 后，取上清直接進行接種檢測。

2. 準備12支精氨酸肉湯培養(yǎng)基、支原體瓊脂培養(yǎng)基（半流體）。

3. 將樣品分別接種到10ml 精氨酸肉湯培養(yǎng)基、半流體培養(yǎng)基中（已冷卻至36℃），每支培養(yǎng)基接種樣品0.5~ 1.0ml，每種樣品接種6 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基，3 支半流體培養(yǎng)基。

4. 接種6d 后，取3 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基中樣品0.5 ~ 1.0ml. 復種于精氨酸肉湯培養(yǎng)基中。

5. 36 ℃ 培養(yǎng)29d, 每隔3d 觀察一次。記錄實驗結果。

（三）結果判斷

培養(yǎng)結束時，精氨酸肉湯培養(yǎng)基分為6支接種，3支取出，3支復種。精氨酸肉湯培養(yǎng)基如有支原體生長，則液體顏色改變（粉色或黃色) 。

半流體培養(yǎng)基中如有支原體生長，則出現(xiàn)絮狀沉淀。

雖然用培養(yǎng)法檢測支原體準確率非常高幾乎沒有失誤，但因為用培養(yǎng)法檢測支原體的準確度非常高幾乎沒有失誤，雖然由于耗時長而不如簡單快速的PCR檢測法，但勝在經濟便宜，因此大家可以學下來，經費不足的時候使用哦~如果您還有其他的技術問題或有支原體檢測外包的需求歡迎直接留言，普拉特澤隨時在線！

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