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  免疫熒光檢測實驗由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，普拉特澤生物病理實驗平臺專業(yè)承接HE染色實驗外包、原位雜交等病理實驗代做服務(wù)，積累專業(yè)豐富的實驗操作經(jīng)驗。上期我們分享《免疫熒光染色操作步驟以及目的——細(xì)胞篇》后大家都說還想繼續(xù)了解，那今天咱們就為大家專門出一期關(guān)于組織篇免疫熒光染色操作步驟以及目的，快點學(xué)起來吧！

一、實驗?zāi)康?/span>

通過細(xì)胞免疫熒光技術(shù)，檢測TRPV4、BK蛋白在組織中的表達(dá)情況。

二、實驗樣品及分組

樣本：大鼠附睪組織

指標(biāo)：TRPV4、BK

三、實驗結(jié)果

圖1  IF染色圖200×

四、實驗結(jié)論

IF染色結(jié)果顯示：

TRPV4、BK蛋白在組織中有特異性表達(dá)，陽性染色為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的綠色和紅色，胞核為DAPI標(biāo)記的藍(lán)色。

五、實驗材料

1、主要儀器

2、主要試劑

五、實驗原理

免疫熒光細(xì)胞是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測定含量。

七、實驗步驟

1.60℃烤片30 min；

2.切片脫蠟至水：先將切片置于二甲苯中10 min，2次。然后依次在100%，95%，85%和75%乙醇，每級放置5-10 min。再用蒸餾水浸洗5 min；

3.熱修復(fù)抗原：將切片浸入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）,微波爐高火加熱8min后拿出，冷卻至室溫。冷卻后PBS（pH7.2~7.6）洗滌3 min x 3次；

4.加入3% H2O2，室溫10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。PBS沖洗3 min x 3次；

5.血清封閉：切片滴加血清放入濕盒中，室溫20 min。甩干不洗；

6.孵育一抗：滴加適當(dāng)稀釋的一抗，對照組滴加等量PBS，4℃冰箱過夜；；

7.加熒光二抗：PBS浸洗3次，每次3 min，吸干切片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBS浸洗3次；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量避光操作；

8.復(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5 min，對標(biāo)本進(jìn)行染核，PBS 4次洗去多余的DAPI；；

9.封片：防熒光淬滅封片劑封片、熒光顯微鏡觀察。

今天關(guān)于免疫熒光染色操作步驟以及目的已經(jīng)全部介紹完了~如果您在實驗過程中遇到技術(shù)問題，或者需要實驗外包和代做，可與我們技術(shù)老師聯(lián)系18570028002（微信同號）