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免疫熒光染色步驟由普拉特澤生物病理實驗平臺為大家總結(jié)分享。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩(wěn)定的免疫熒光染色外包實驗服務(wù)，本文給大家分享咱們技術(shù)長期總結(jié)下來的免疫熒光染色步驟以及目的——細(xì)胞篇

一、實驗?zāi)康?/strong>

通過細(xì)胞免疫熒光技術(shù)，檢測p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞中的表達(dá)。

二、實驗樣品及分組

細(xì)胞：MCF-7、MDA-MB-231

指標(biāo)：P53（proteintech10442-1-AP）

三、實驗結(jié)果

MDA-MB-231

圖1  IF染色圖200

四、實驗結(jié)論

IF染色結(jié)果顯示：

p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231有表達(dá)，陽性染色為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的綠色，胞核為DAPI標(biāo)記的藍(lán)色。

五、實驗材料

1、主要儀器

2、主要試劑 

六、實驗原理

免疫熒光細(xì)胞是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測定含量。

七、實驗步驟

(1)在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用生理鹽水浸洗3次；

(2)用4%的多聚甲醛固定爬片15 min， 生理鹽水浸洗玻片3次；

(3)0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透15min（細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原省略此步驟）；

(4)生理鹽水浸洗玻片3次，吸干生理鹽水；

(5)每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗，4℃孵育過夜；

(6)加熒光二抗：生理鹽水浸洗爬片3次，每次3 min，吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中37℃孵育1h，生理鹽水浸洗3次；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量避光操作；

(7)復(fù)染核：滴加DAPI避光孵育5 min，對標(biāo)本進(jìn)行染核，生理鹽水4次洗去多余的DAPI；

(8)在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。

好啦，免疫熒光染色步驟我們就簡單介紹到這里啦，同學(xué)們有沒有一個簡單的了解呢？不懂得可以給客服留言技術(shù)給您詳細(xì)解答。下一篇再詳細(xì)為大家介下一篇我們詳細(xì)講解免疫熒光組織篇，普拉特澤生物誓讓大家透徹免疫熒光染色實驗的檢測過程。當(dāng)然若果您有免疫熒光實驗方法或其他醫(yī)學(xué)科研實驗外包的需求，歡迎隨時咨詢：18570028002（微信同號）哦