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蛋白功能已成為當下研究的熱點之一，蛋白間相互作用在細胞的生命活動中起著關(guān)鍵作用。相互作用的蛋白之間通過形成復雜的功能性復合體，參與細胞內(nèi)一系列的信號級聯(lián)反應(yīng)，從而調(diào)控細胞及個體的生命活動。研究蛋白間相互作用的常用方法有：酵母雙雜、雙分子熒光互補、免疫共沉淀和GST pull-down等。那么今天普拉特澤生物來詳細講的——GST pull-down實驗。

GST pull-down實驗---GST：谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferase)是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗技術(shù),近年來越來越受到廣大學者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巰基轉(zhuǎn)移酶）融合蛋白親和固化在谷胱甘肽標記的磁珠上,作為與目的蛋白親和的支撐物，充當一種“誘餌蛋白”，目的蛋白溶液與之孵育，可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”(目的蛋白),洗脫結(jié)合物后通過SDS-PAGE電泳分析，從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白，“誘餌蛋白”和“捕獲蛋白”均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡單易行,操作方便?！ST：谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferase)

GST pull-down技術(shù)主要在體外驗證兩種蛋白之間是否存在直接的相互作用，其用途主要有兩個方面：一是證實兩種已知蛋白之間可能存在的相互作用；二是用于尋找能與已知的蛋白發(fā)生相互作用的未知蛋白。詳細作用有：

1. 確定某一個蛋白質(zhì)與另一個蛋白質(zhì)的直接作用關(guān)系。

2. 篩選某一個蛋白質(zhì)直接結(jié)合的蛋白質(zhì)族群。

3. 驗證酵母雙雜交系統(tǒng)結(jié)果的有效性。

GST pulldown檢測的優(yōu)勢與不足

優(yōu)勢：

1. 區(qū)別于CoIP，GST pull down技術(shù)可以明確兩個蛋白質(zhì)之間是否直接作用。

2. 可用于篩選與目的蛋白質(zhì)直接結(jié)合的蛋白質(zhì)族群。

3. 可聯(lián)合酵母雙雜交系統(tǒng)綜合評估蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系，是一個有效的驗證酵母雙雜交系統(tǒng)的體外試驗技術(shù)。

不足：體外表達的重組蛋白，無法完全模擬特定生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)活性及結(jié)合情況。

通常我們研究蛋白互作的數(shù)據(jù)庫有很多，這里給大家推薦五個，可以自行選擇使用：

1. MINT

Licata L, Briganti L, Peluso D, et al. MINT, the molecular interaction database: 2012 update[J]. Nucleic acids research, 2011, 40(D1): D857-D861.

網(wǎng)址：https://mint.bio.uniroma2.it

2. STRING

Szklarczyk D, Morris J H, Cook H, et al. The STRING database in 2017: quality-controlled proteinprotein association networks, made broadly accessible[J]. Nucleic acids research, 2017, 45(D1): D362-D368.

網(wǎng)址：http://string-db.org/

3. HPRO

Prasad, T. S. K. et al. (2009) Human Protein Reference Database - 2009 Update. Nucleic Acids Research. 37, D767-72.

網(wǎng)址：http://www.hprd.org/

4. BioGRID

Chatraryamontri A, Oughtred R, BoucherL, et al. The BioGRID interaction database: 2017 update[J]. Nucleic acids research, 2017, 45(D1): D369-D379.

網(wǎng)址：http://thebiogrid.org/

5. DIPOS

Database of Interacting Proteins in Oryza SativaSapkota A, Liu X, Zhao X M, et al. DIPOS: database of interacting proteins in Oryza sativa[J]. Molecular BioSystems, 2011, 7(9): 2615-2621.

網(wǎng)址：http://comp-sysbio.org/dipos/?id=5

好啦，那關(guān)于GST pull down實驗我們就簡單介紹到這里啦！下期跟大家分享GST pull down實驗的操作步驟，如果您正在準備操作這個實驗或有GST pull down實驗外包的需求，歡迎隨時留言與普拉特澤分子檢測平臺的技術(shù)進行技術(shù)交流溝通！

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