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    Question：ELISA實(shí)驗(yàn)的方法有哪些？（普拉特澤生物提供長(zhǎng)期穩(wěn)定的ELISA實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)）

    答：

一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

通過Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)各樣本中目的蛋白的表達(dá)。

二、 實(shí)驗(yàn)樣本

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)值

2.標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1  cTn-1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

   標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果顯示，本次 cTn-1 檢測(cè)結(jié)果可信。

3. 樣品檢測(cè)結(jié)果

圖2  Elisa檢測(cè)柱狀圖

四、 結(jié)果說(shuō)明

    如圖所示，與Sham組相比，3個(gè)CVB3病毒處理組無(wú)顯著性差異。

五、 ELISA實(shí)驗(yàn)原理

往預(yù)先包被的微孔中依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的cTn-1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度 (OD 值)，計(jì)算樣品濃度。

六、 實(shí)驗(yàn)通用儀器及試劑

1. 主要儀器

2.主要試劑

六、重溫一下ELISA實(shí)驗(yàn)步驟

1.樣品處理

血清：3000xg離心10分鐘，取上清即可檢測(cè)。

2.ELISA檢測(cè)步驟（以試劑盒操作說(shuō)明書為準(zhǔn)）

(1)制備好所有試劑、工作標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。

(2)從板架上移除多余的微孔板條，將它們放入裝有干燥劑包的鋁箔袋中，重新密封并4oC存儲(chǔ)。

(3)向適當(dāng)?shù)目字屑尤?/span>50μL樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。

(4)每孔加入50μL抗體混合物。

(4)蓋好孔，在室溫下溫育1小時(shí)，400rpm搖動(dòng)。

(5)棄去溶液并用洗滌緩沖液洗滌3次。

(6)向每個(gè)孔中加入100μlTMB,400rpm避光室溫孵育100min。

(7)每孔中添加100μL終止液，混勻1min,在450 nm處讀取吸光值。

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