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一、 實驗目的

通過Elisa實驗技術(shù)檢測各樣本中目的蛋白的表達。

二、 實驗樣本

一、 實驗結(jié)果

1. 標準品檢測值

2. 標準品標準曲線

圖1 Rat IL-4標準曲線

標準曲線結(jié)果顯示，本次IL-4檢測結(jié)果可信。

3.樣品檢測結(jié)果

圖2 Elisa檢測柱狀圖

一、 ELISA實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠白細胞介素4（IL-4）水平。用純化的大鼠白細胞介素4（IL-4）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入大鼠白細胞介素4（IL-4），再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠白細胞介素4（IL-4）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠白細胞介素4（IL-4）含量。

四、實驗通用儀器及試劑

1. 主要儀器

2.主要試劑

一、 實驗步驟

3.1 樣品處理

浸提液我司提供。

3.2 ELISA檢測步驟（以試劑盒操作說明書為準）

1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯

色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液

后15分鐘以內(nèi)進行。

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