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   大家好呀，前面給大家分享了Co-IP實(shí)驗(yàn)的原理、步驟和注意事項(xiàng)，今天咱們來學(xué)習(xí)的就是Co-IP實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果中容易出現(xiàn)的問題以及解決方法。本文由普拉特澤生物分子檢測(cè)中心的技術(shù)小哥哥小姐姐們經(jīng)過大量實(shí)操經(jīng)驗(yàn)總結(jié)而來，不聽錯(cuò)過一個(gè)億哦。普拉特澤生物專業(yè)承接包括Co-IP代做等各種分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，服務(wù)快周期短，來pick一下我吧。

   鏈接奉上，大家自行復(fù)習(xí)哦！：

   《Co-IP免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)——原理介紹》
   《Co-IP免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)——操作步驟》
   《Co-IP免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)——注意事項(xiàng)》

   Co-IP免疫共沉淀常見問題及解決方法：
   一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果高背景

   原因1：制備樣品中可能有不完全溶解的大的蛋白復(fù)合體

   制備樣品后進(jìn)行短暫超聲處理（3次，每次5秒鐘），然后離心純化，取上清后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)

   原因2：洗滌不徹底

   多次洗滌，并逐漸增加洗滌緩沖液中的NaCl和去垢劑濃度

   原因3：非特異性蛋白吸附于珠子上

   進(jìn)行Preclearing以排除非特異性吸附

   原因4：抗體本身特異性不好

   選擇合適的抗體，可以考慮單抗

   原因5：使用了太多的抗體

   進(jìn)行條件優(yōu)化減少抗體

   原因6：使用了過多的細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解

   減少樣本量，我們推薦100-500μg細(xì)胞裂解物

   原因7：抗原降解

   保證樣品中加入了蛋白酶/磷酸酶抑制劑，盡量使用新鮮制備的樣品

   原因8：WB步驟出現(xiàn)錯(cuò)誤或不規(guī)范

   使用規(guī)范的WB,注意封閉、一二抗稀釋的條件

   二、無信號(hào)

   原因1：目的蛋白在樣本中表達(dá)量低或者不表達(dá)

   首先對(duì)目的蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，或者加大IP中加入的蛋白裂解物并進(jìn)行預(yù)處理。

   胞內(nèi)蛋白互作的水平較低或沒有互作，增加蛋白裂解物或進(jìn)行誘導(dǎo)處理。

   原因2：細(xì)胞裂解液使用不當(dāng)

   根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇，慎重考慮。

   原因3：目的蛋白未被洗脫

   保證使用合適的洗脫液，保證洗脫液的強(qiáng)度和pH值合適。

   原因4：抗體沒有很好的與珠子相互結(jié)合

   選擇合適的珠子。

   原因5：抗體選擇不當(dāng)或者不工作

   利用WB對(duì)抗體進(jìn)行驗(yàn)證

   原因6：抗體使用不足

   查閱文獻(xiàn)或者說明書，并多次優(yōu)化或選擇合適的抗體使用量。
   那么關(guān)于Co-IP實(shí)驗(yàn)操作過程和結(jié)果常見的問題以及解決方法我們就介紹完啦，想學(xué)習(xí)詳細(xì)Co-IP免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)的操作過程的同學(xué)歡迎點(diǎn)擊：《Co-IP 理論+實(shí)操》詳細(xì)學(xué)習(xí)哦！