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一、阿利新藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介與原理

阿利新藍(lán)（Alcian）又稱(chēng)愛(ài)先藍(lán)或阿爾辛藍(lán)等，是一種類(lèi)銅鈦花青共軛染料，這種陽(yáng)離子染料與酸性基團(tuán)結(jié)合，即阿爾辛藍(lán)與組織內(nèi)含有的陰離子基團(tuán)如羧基和硫酸根形成不溶性復(fù)合物。阿利新藍(lán)由中央含銅的酞菁環(huán)與四個(gè)異硫脲基通過(guò)硫醚鍵相連而成。該異硫脲基呈中度堿性，使阿利新藍(lán)帶陽(yáng)離子。利用染液的不同pH值可區(qū)分粘液物質(zhì)的類(lèi)屬，pH 值為2.5時(shí)組織內(nèi)的羧基電離，帶有一個(gè)負(fù)電荷，與阿利新藍(lán)中的陽(yáng)離子形成鹽鍵，是帶有羧基的組織（如蛋白多糖/透明質(zhì)酸以及上皮酸性黏蛋白）染色。pH值為1.0時(shí)，組織內(nèi)的硫酸根電離，帶有一個(gè)負(fù)電荷，與阿利新藍(lán)中的陽(yáng)離子形成鹽鍵，使帶有硫酸根的組織（如硫酸黏液物質(zhì)）染色。中性黏蛋白(如胃黏膜和Brunner腺體部位的中性黏蛋白）不能與阿利新藍(lán)反應(yīng)。

二、阿利新藍(lán)染色臨床意義

臨床采用阿利新藍(lán)染色法進(jìn)一步鑒別各類(lèi)血細(xì)胞提高對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病診斷具有重要意義。阿利新藍(lán)是一種陽(yáng)離子染料，與酸性基團(tuán)形成鹽后，使胞質(zhì)中的酸性粘多糖染成藍(lán)色，定位于胞質(zhì)內(nèi)。粒細(xì)胞系原粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，早幼粒細(xì)胞呈中度陽(yáng)性，成熟中性粒細(xì)胞則為弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。巨核細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)。單核細(xì)胞陽(yáng)性反應(yīng)應(yīng)表現(xiàn)為胞質(zhì)邊緣染成藍(lán)色。淋巴細(xì)胞和幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。

三、阿利新藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)步驟（樣本與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌襟E均有不同）

Step1：烘片、脫蠟。65℃烘片30min；依次經(jīng)二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ脫蠟

Step2：依次經(jīng)無(wú)水乙醇Ⅰ、95%Ⅰ、85%、75%、自來(lái)水水化。

Step3：阿爾新藍(lán)染色液染色依次入 Alcian 酸化液、 Alcian 染色液染色浸泡，流水沖洗：入核固紅染色液復(fù)染，流水沖洗。（染色過(guò)程可在鏡下控制，適當(dāng)調(diào)整時(shí)間）

Step4：脫水。依次經(jīng)85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒，無(wú)水乙醇Ⅰ30s、無(wú)水乙醇Ⅱ1min

Step5：透明。經(jīng)二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min

Step6：封片。組織上方滴加中性樹(shù)膠，玻片稍?xún)A斜，用手將蓋片順玻片斜面輕放，防止氣泡產(chǎn)生

Step7：20g兒甲綠復(fù)染10~20min

Step8：顯微鏡下觀察拍照

四、阿利新藍(lán)染色常見(jiàn)問(wèn)題分析及原因解析

問(wèn)題1：染色過(guò)深或過(guò)淺

解決辦法：控制好染色時(shí)間。

問(wèn)題2：切片染色不均

解決辦法：取材固定不當(dāng)，取材規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，固定徹底；脫水不夠，重新脫水、透明、浸蠟。

問(wèn)題3：切片染色模糊不清

解決辦法：包埋蠟溫度過(guò)高；脫水透明不徹底。