子曾經(jīng)曰過“知己知彼，百戰(zhàn)不殆”，很多科研工作者對實驗技能出神入化，但對所使用的試劑生產(chǎn)和應(yīng)用知之甚少，導(dǎo)致買到不合適或假冒偽劣的產(chǎn)品，對時間和經(jīng)費造成極大的損失浪費，所以選擇合適的抗體，事半功倍。

一抗的選擇

檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：

1. 實驗應(yīng)用的類型

一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB /IHC /ICC /ELISA分析等，如果抗體說明書沒有說明提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證。如果抗體不適用某些分析試驗，會在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗。

2. 樣本蛋白的提取或處理

某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體只識別天然折疊的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時，應(yīng)注意某些抗體只識別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則使用于無需抗原修復(fù)解交聯(lián)步驟的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會在抗體說明書上應(yīng)用部分標(biāo)示出來。

所以綜上所述：

適用于IP（天然蛋白）的抗體不一定適用于WB（表位暴露）

適用于WB的不一定適用于IHC

適用于IHC-P（抗原修復(fù)）的不一定適用于IHC-Fr（不修復(fù)）

購買前，務(wù)必仔細(xì)閱讀抗體說明書！

3. 樣本的物種

一般來說，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇比較重要，對于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)。一抗的來源主要有兔子和小鼠這兩個物種，意思也就是，如果你的樣本是兔子的，那就避免買兔來源的一抗；如果你的樣本是小鼠的，那就避免買小鼠源的一抗。

4. 單克隆與多克隆

由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合。同一個抗原決定簇在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。

在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高。

二抗的選擇

二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點使得其在免疫學(xué)實驗中得以廣泛應(yīng)用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對每一個一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結(jié)合幾個二抗分子，從而使信號大大增強(qiáng)，提高了實驗靈敏度。

二抗，廣義上是指專門和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從以下幾個方面考慮：

1.一抗的種屬來源

根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。例如：一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。

2.一抗的類別亞型

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會在產(chǎn)品說明書中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對這一亞型的二抗。此種抗體在雙標(biāo)記實驗中尤其合適。

3.二抗的偶聯(lián)標(biāo)記

一般來講，偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP）、熒光基團(tuán)、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。WB和ELISA常用的二抗是酶標(biāo)二抗，而免疫熒光實驗中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。

寫在最后：抗體廣泛應(yīng)用于各種科研領(lǐng)域，且價格不菲。謹(jǐn)慎選擇質(zhì)量可靠，適用的抗體能夠有效避免科研時間及成本的浪費，不要因為貪圖便宜，選擇了一些“平價替代”產(chǎn)品，其質(zhì)量及售后，無法有效保證。