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支原體培養(yǎng)法檢測支原體操作步驟由普拉特澤生物表達檢測平臺分享，培養(yǎng)法檢測支原體非常經(jīng)典，準確率高，得到界內(nèi)認可。普拉特澤生物承接的多例支原體檢測外包實驗中，有部分周期不緊急的實驗會選擇培養(yǎng)法。

培養(yǎng)法為最為經(jīng)濟可靠的方法，但其實驗周期較長，所以常用來進行對懷疑細胞的最后甄別。常用于細胞及臨床治療細胞的支原體檢查。

（一）材料與設(shè)備

1. 精氨酸肉湯培養(yǎng)基按說明稱量粉劑，蒸餾水配制，高壓除菌（加20％胎牛血清）。

2. 支原體瓊脂培養(yǎng)基按說明稱量粉劑，蒸餾水配制，高壓除菌（加20％胎牛血清）。

3. 其他超凈工作臺、無菌吸管、試管架、培養(yǎng)試管／皿、37°C 培養(yǎng)箱。

（二）操作步驟

1. 樣品的儲存。樣品取材后，最好盡快進行檢測。樣品如在24h 以內(nèi)進行支原體檢測，可儲存在2~8℃; 如果超過24h 樣品應(yīng)放置于－20℃ 以下保存。-20℃保存的樣品，進行檢測時需重新加入到對照培養(yǎng)細胞中，培養(yǎng)72h 后，取上清直接進行接種檢測。

2. 準備12支精氨酸肉湯培養(yǎng)基、支原體瓊脂培養(yǎng)基（半流體）。

3. 將樣品分別接種到10ml 精氨酸肉湯培養(yǎng)基、半流體培養(yǎng)基中（已冷卻至36℃），每支培養(yǎng)基接種樣品0.5~ 1.0ml，每種樣品接種6 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基，3 支半流體培養(yǎng)基。

4. 接種6d 后，取3 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基中樣品0.5 ~ 1.0ml. 復(fù)種于精氨酸肉湯培養(yǎng)基中。

5. 36 ℃ 培養(yǎng)29d, 每隔3d 觀察一次。記錄實驗結(jié)果。

（三）結(jié)果判斷

培養(yǎng)結(jié)束時，精氨酸肉湯培養(yǎng)基分為6支接種，3支取出，3支復(fù)種。精氨酸肉湯培養(yǎng)基如有支原體生長，則液體顏色改變（粉色或黃色) 。

半流體培養(yǎng)基中如有支原體生長，則出現(xiàn)絮狀沉淀。

雖然用培養(yǎng)法檢測支原體準確率非常高幾乎沒有失誤，但因為用培養(yǎng)法檢測支原體的準確度非常高幾乎沒有失誤，雖然由于耗時長而不如簡單快速的PCR檢測法，但勝在經(jīng)濟便宜，因此大家可以學下來，經(jīng)費不足的時候使用哦~如果您還有其他的技術(shù)問題或有支原體檢測外包的需求歡迎直接留言，普拉特澤隨時在線！

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