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動物細(xì)胞原代培養(yǎng)操作步驟【細(xì)胞實(shí)驗外包】

今天普拉特澤生物來跟大家一起學(xué)習(xí)動物細(xì)胞的培養(yǎng)，本單元應(yīng)大家關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)傳代冷凍復(fù)蘇的各種技術(shù)問題而出。普拉特澤細(xì)胞實(shí)驗平臺專業(yè)承接原代細(xì)胞分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化等細(xì)胞實(shí)驗的各種基礎(chǔ)準(zhǔn)備工作，經(jīng)手操作大量的生物細(xì)胞資源，總結(jié)出一套簡單適合大多數(shù)動物細(xì)胞分離與培養(yǎng)傳代的經(jīng)驗，一起來看看吧！

動物細(xì)胞培養(yǎng)（animal cell culture）就是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。

我們常見的動物細(xì)胞培養(yǎng)種類主要分為，原代細(xì)胞培養(yǎng)與傳代細(xì)胞培養(yǎng)，今天我們來看看原代細(xì)胞培養(yǎng)的詳細(xì)步驟！

原代細(xì)胞培養(yǎng)是指將動物各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種胰蛋白酶、螯合劑或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng)。培養(yǎng)的細(xì)胞為正常的動物細(xì)胞，一般培養(yǎng)10代后不再增殖，死亡。

小鼠正常肝細(xì)胞

我們培養(yǎng)動物的原代細(xì)胞主要分為取材、漂洗、剪切、消化、制備單細(xì)胞懸液、接種、培養(yǎng)等步驟，咱們一個一個看（以小白鼠為例）：

1、待培養(yǎng)細(xì)胞組織取材

頸椎脫臼法處死小白鼠，放在100ml的燒杯中用70%乙醇消毒3min。用剪刀剪開腹部，取出腎、肝、脾(任意一種臟器)。

（1）將小白鼠斷頸處死，然后用75%酒精或1%新潔爾滅浸泡消毒，迅速進(jìn)入無菌室。

（2）將小白鼠置超凈工作臺上，打開腹腔

2、清洗組織

在盛有PBS緩沖液平皿中洗滌數(shù)次，剔除包膜、結(jié)締組織，將剔除后的臟器放入另一個盛有PBS的平皿中。

3、剪切組織

將腎、肝、脾剪成1mm3(剪成肉末狀)大小的組織塊，再次清洗，洗去殘留的血細(xì)胞，以備消化。

4、消化組織

（1）在50 ml離心筒中加入0.25%胰蛋白酶溶液25ml在溫暖的環(huán)境中或置于37°水浴搖床中輕輕搖動15 min，轉(zhuǎn)速約為180r/min。

（2）讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50 ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10 ml上清加入Im小牛血清的比例加入生血清以滅活胰蛋白酶。(小牛血清在共用無菌操作臺上取用)

（3）在離心管中殘留未消化組織塊中再次加入胰蛋白酶進(jìn)行消化，重復(fù)以上1和2步驟。

5、制備單細(xì)胞懸液

（1）將混合的細(xì)胞懸液離心，1200 rpm，5 min，棄上清。

（2）將沉淀用新鮮的無菌PBS重懸，再1000-1200 rpm，5 min離心。

（3）用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止，然后再按照第一步進(jìn)行離心，離心后棄去上清液，將沉淀用少量細(xì)胞培養(yǎng)液反復(fù)吹打，制成細(xì)胞懸液。

6、細(xì)胞接種

（1）將細(xì)胞懸液接種到細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。

（2）用濾器過濾細(xì)胞培養(yǎng)液再懸沉淀，并使終體積為20 ml。

7、細(xì)胞培養(yǎng)

（1）在培養(yǎng)瓶外做好標(biāo)記(標(biāo)明所培養(yǎng)細(xì)胞的名稱和時間)，

（2）置于CO?的孵箱中培養(yǎng)，

（3）72h后即可觀察。

好啦，那關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)的原代細(xì)胞分離與培養(yǎng)步驟我們就介紹到這里啦，當(dāng)然不一定所有的細(xì)胞培養(yǎng)步驟都一模一樣，有一些要用特定的培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件，如果有不懂的實(shí)操問題或有細(xì)胞實(shí)驗需外包與代做，可以隨時給客服留言，普拉特澤的技術(shù)會第一時間給到您回復(fù)的哦！

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