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支原體檢測實驗方法介紹由普拉特澤生物表達檢測平臺總結(jié)分享。支原體是一類無細胞壁、形態(tài)多樣的原核細胞微生物，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的微生物，普拉特澤生物表達檢測平臺為廣大科研人員提供支原體檢測實驗外包服務(wù)，歡迎咨詢哦。

支原體在細胞進行培養(yǎng)、傳代時極易污染。目前我們常用的支原體檢測方法有PCR法、DNA染色法、化學(xué)發(fā)光法、支原體培養(yǎng)法，我們來一個一個看：

1、PCR檢測支原體

這種方法是目前最常用的方法，它的檢測方式主要有凝膠電泳檢測和熒光定量檢測。其原理都是在支原體16S rRNA基因的保守區(qū)設(shè)計引物，通過檢測支原體DNA來檢測細胞中有無支原體的污染。如果有支原體的存在，則在瓊脂糖凝膠電泳或者熒光定量擴增時，就可以檢測到。這種方法的優(yōu)點是檢測靈敏度高，特異性好，檢測速度快。

2、DNA染色法檢測支原體

原理為使用DNA染色試劑（如：Hoechst 33258）對細胞進行染色，由于支原體中的核酸也可以被著色，所以，如果有支原體污染，會在細胞表面或者培養(yǎng)基中見到大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒，與細胞核呈現(xiàn)的橢圓形、更大更亮熒光形成鮮明對比。這種方法有很多種實驗檢測方式，如果作為簡單檢測來說，最大的優(yōu)點就是快速，直觀；但是它的靈敏度會比較低，在支原體污染不嚴(yán)重時容易得到模棱兩可的結(jié)果，只有在污染嚴(yán)重時才能得到可靠度較高的結(jié)果。小伙伴們?nèi)绻褂眠@種方法來進行比較嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測，可參考《中國藥典》中的方法（見附錄）來設(shè)置相應(yīng)的對照及判定標(biāo)準(zhǔn)，但是相應(yīng)的檢測時間會有所延長。

3、化學(xué)發(fā)光法檢測支原體

化學(xué)發(fā)光檢測的原理是利用支原體內(nèi)特有的酶，與提供的底物相互作用，使其中的ADP轉(zhuǎn)化為ATP，熒光素酶可以利用產(chǎn)生的ATP與熒光素酶底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測到的光，光可以被我們使用儀器檢測到。如果沒有支原體存在，熒光素酶就沒有足夠的ATP去發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生光，儀器檢測到的數(shù)值就比較低；如果有支原體存在，就可以使大量的ADP轉(zhuǎn)化為ATP，供熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生大量的光，儀器檢測到的數(shù)值就比較高。這種方法的優(yōu)點是檢測的靈敏度高，速度快，但是只能檢測活的支原體。

4、支原體培養(yǎng)法

使用支原體肉湯培養(yǎng)基接種待測樣品（細胞培養(yǎng)上清等），經(jīng)過約7-21天的培養(yǎng)，觀察有無支原體的生長，以此來判斷細胞培養(yǎng)基中有無支原體存在。此種方法非常經(jīng)典，得到全世界范圍內(nèi)認(rèn)可，是被《中國藥典》2015版第三部分3301，歐洲藥典第六版2.6.7部分記載的支原體檢測方法。雖然被廣泛認(rèn)可，但是需要耗時超級長（約1個月）才能知道是否有污染。

好啦，這四種常見的支原體檢測方法小編就介紹完啦！有沒有幫到您呢？更多的關(guān)于支原體檢測疑問或者檢測方法請等待小編下期的分享哦，如果您也有支原體檢測外包的需求的話歡迎隨時給客服留言哦！

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