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有客戶咨詢我們裸鼠皮下成瘤的實(shí)驗(yàn)怎么做，我們做的效果怎么樣。

口說無憑，各位老師看一下我們具體的實(shí)驗(yàn)吧，下方提供的圖片都是我們動物平臺的小伙伴做的呢，老師們覺得有什么地方可以指點(diǎn)的，可以直接聯(lián)系我們 ~

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應(yīng)用范圍：

裸鼠荷瘤就是將細(xì)胞或組織通過原位或皮下移植到裸鼠體內(nèi)，使其成瘤。無胸腺裸鼠（Nude Mouse，簡稱裸鼠）目前是醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究領(lǐng)域中不可缺少的實(shí)驗(yàn)動物模型。由于其先天性胸腺缺陷，缺乏T淋巴細(xì)胞功能，導(dǎo)致其在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、藥品與生物制品的安全性評價及有效藥品的篩選等實(shí)驗(yàn)方面，有著很高的研究價值。

優(yōu)點(diǎn)：

1. 讓一群裸鼠帶有相同腫瘤，生長速率大致相同，個體差異較小，存活率高；

2. 可連續(xù)移植，腫瘤長期保留；

3. 實(shí)驗(yàn)周期較短，實(shí)驗(yàn)條件易于控制；

4. 對宿主的影響類似，可以客觀判斷療效。

裸鼠成瘤文章1.jpg

裸鼠成瘤文章2.jpg

實(shí)驗(yàn)過程

細(xì)胞準(zhǔn)備

1. 同的細(xì)胞成瘤能力不同，在選擇時應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮途唧w情況綜合考慮。如乳腺癌細(xì)胞系MCF-7雖然經(jīng)常用于體外實(shí)驗(yàn)，但成瘤率差，生長慢，因此一般不考慮。

2. 一般分為鼠源的和人源的細(xì)胞系，鼠源的一般更容易成瘤，但人源的更貼近人類腫瘤生長情況。

3. 取凍存于液氮的腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇并擴(kuò)增，確保腫瘤細(xì)胞的活力和較好的生長狀態(tài)。一般鼠源腫瘤細(xì)胞接種2-100萬/只，人源的細(xì)胞系需要200-1000萬/只以上?？山Y(jié)合細(xì)胞和裸鼠的實(shí)際情況，最高可以注射1000萬/0.1ml，不可再高，因?yàn)榧?xì)胞幾乎達(dá)到飽和狀態(tài)。

注意計(jì)算好細(xì)胞用量，一般要多準(zhǔn)備5只裸鼠左右細(xì)胞用量。

裸鼠準(zhǔn)備

一般選擇5-6w齡的裸鼠，太小死亡率太高，太大免疫力會增強(qiáng)，不易成瘤。如無特殊要求雌雄均可。

接種步驟

胰酶消化細(xì)胞，計(jì)數(shù)后將其重懸于生理鹽水中；
選擇進(jìn)針部位（一般選擇腋下或腹股溝等血管豐富的部位），用酒精棉球擦拭進(jìn)針部位；
向前方穿行，注射前針頭左右動一下，若無阻力則證明在皮下，否則可能在皮內(nèi)或肌肉里面；
緩慢推注，一般體積為100-150μL，注射完后緩慢拔出針頭，可在注射部位看到明顯的鼓包；
接種點(diǎn)離進(jìn)針點(diǎn)盡量遠(yuǎn)一些，防止漏液和污染。

結(jié)果處理

一般接種5天后即可看到腫瘤出現(xiàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要去的生長天數(shù)，達(dá)到時間后頸椎脫臼處死裸鼠，取出腫瘤，拍照。拍照時需要放置兩把直尺，可用于后期計(jì)算腫瘤體積。

數(shù)據(jù)提交示例

裸鼠成瘤文章5.jpg

拍照時注意光線，標(biāo)尺擺放整齊，對焦不要模糊，另還需提交帶有各腫瘤體積的EXCEL表，如下所示：

裸鼠成瘤文章6.jpg

問題解答:

（1）瘤子長不出來是怎么回事？

一方面可能是細(xì)胞狀態(tài)差，活力不好，或是腫瘤細(xì)胞不易成瘤，需加入Matrigel輔助或增大接種量或更換細(xì)胞系；一方面可能是小鼠周齡太大，或小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠（Nod-scid小鼠，NOG小鼠＞Nude裸鼠）。

（2）小鼠瘤子長起來又消失？

腫瘤塊先縮小，后變大很常見，很可能是炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收，繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否經(jīng)過幾周還能長出來，長不起來建議換鼠。

（3）均一性很差，腫瘤體積差距較大？

如果荷瘤分組發(fā)現(xiàn)小鼠腫瘤體積差距很大，這可能跟小鼠周齡及接種細(xì)胞量不一致導(dǎo)致，建議重新做實(shí)驗(yàn)分組。

（4）是否可以在一只小鼠進(jìn)行多個點(diǎn)荷瘤？

不可以，一只老鼠就只能接種一個點(diǎn)。因?yàn)橐粋€老鼠身上有多個腫瘤塊的情況下，可能會相互影響。

（5）是否應(yīng)用免疫抑制劑加速腫瘤生長？

如果裸鼠荷瘤不生長，可以參考文獻(xiàn)，用免疫抑制劑如環(huán)磷酰胺（抑制裸鼠NK細(xì)胞活性）促進(jìn)生長；不過最好不要為了縮短造模周期來加速生長，因?yàn)榭赡軙斐蓾€，這樣就不得不中止實(shí)驗(yàn)。所以一般情況下，應(yīng)盡量符合細(xì)胞系本身的生長特性，不應(yīng)過多地人為的干擾。