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細胞增殖檢測方法匯總【附視頻教程】

2022-07-05 16:29:23

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

        細胞增殖檢測方法匯總由普拉特澤生物細胞實驗平臺總結分享,文末附上細胞增殖檢測視頻教程供大家復盤學習。上篇我們介紹了什么是細胞增殖,簡單梳理了一下細胞增殖的有絲分裂、無絲分裂、減數(shù)分裂三種分裂形式,忘記了回去復習哦,今天實驗平臺的技術為大家總結的是細胞增殖檢測的實驗方法。

         細胞增殖檢測法(一):直接計數(shù)法

         這是一種非常簡單的檢測方法,我們可以利用計數(shù)板或技術儀得出細胞數(shù)目然后對數(shù)目進行比較即可。其缺點是不適合評估特定亞群、和數(shù)量較多的細胞計數(shù)。

         細胞增殖檢測法(二):直接Brdu/EdU檢測法

          Brdu中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細胞培養(yǎng)加入,而后利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物,雙重染色,可判斷增殖細胞的種類,增殖速度,對研究細胞動力學有重要意義。

          細胞增殖檢測法(三):直接MTT檢測法

          MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝,是檢測細胞增殖活力的一種簡便準確的方法,其原理是在活細胞生長和增殖過程中,線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲(Formazan),生成的甲瓚的多少與細胞的數(shù)量和細胞的活力成正比。

          細胞增殖檢測法(四):CCK-8檢測法

          CCK-8就是MTT的升級版,CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8——一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內的脫氫酶驗明正身,在脫氫酶作用下,還原生成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關系。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。

          細胞增殖檢測法(五):直接3H-TdR滲入法

          胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的堿基,也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DNA合成代謝過程,那之后的每一條新合成的DNA雙鏈像被安裝了GPS定位器一樣,都能被液體閃爍計數(shù)器檢測到,通過測定細胞的放射性強度,可以反映細胞DNA的代謝及細胞增殖情況。優(yōu)點:3H-TdR摻入法敏感性高,客觀性強,重復性好。缺點:需一定設備條件:液體閃爍計數(shù)器,這玩意不便宜,同時還存在放射性核素污染問題,真是傷錢包又傷身體。

          細胞增殖檢測法(六):核抗原Ki‐67染色法

           Ki-67染色,研究人員可以評估處于細胞周期所有活躍期的總增殖細胞的百分比??蒲腥藛T可以借此觀察藥物或未知化合物的刺激效應或抗增殖效應??捎妹庖呓M織化學技術或流式細胞術檢測。

          細胞增殖檢測法(七):CFSE檢測法

           羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)是一種可穿透細胞膜的熒光染料,可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯(lián)到細胞蛋白質上,是一種良好的細胞標記物。其檢測法原理:CFSE進入細胞后,可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯(lián)到細胞蛋白質上。當細胞分裂時,CFSE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強度是在親代細胞的一個增殖的細胞群中,各連續(xù)代細胞的熒光強度呈對遞減,利用流式細胞儀在488nm激發(fā)光和熒光檢測通道可對其進行分析。

           好啦,那檢測細胞增殖的實驗方法我們就介紹到這里啦,視頻學習點擊《細胞實驗》如果你還知道更多檢測細胞增殖的方法歡迎留言,我們會一個一個補充上的哦,有需要細胞增殖檢測的老師也請一定要選擇普拉特澤生物!




        

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