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貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、組織切片衰老實(shí)驗(yàn)操作步驟【簡單好學(xué)】

細(xì)胞衰老實(shí)驗(yàn)的操作步驟由普拉特澤生物帶領(lǐng)大家一起學(xué)習(xí)！衰老細(xì)胞時(shí)的形態(tài)變化主要表現(xiàn)為形狀變大、變平、胞核增大、核膜內(nèi)陷、染色質(zhì)固縮、胞內(nèi)溶酶體變多等，普拉特澤生物——細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)專業(yè)承接細(xì)胞衰老實(shí)驗(yàn)的外包與代測服務(wù)，可以檢測貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、以及組織切片的細(xì)胞衰老情況，下面我們就以這三種樣本為例，一個(gè)一個(gè)來看看他們進(jìn)行細(xì)胞衰老實(shí)驗(yàn)的操作步驟！

首先是貼壁細(xì)胞衰老檢測的實(shí)驗(yàn)步驟：

1、吸除培養(yǎng)基，用PBS（或試劑盒里的細(xì)胞清洗液）洗滌細(xì)胞3遍。

2、吸取清洗液，加入固定液室溫固定細(xì)胞15min。

3、吸去固定液，用PBS9（或試劑盒里的細(xì)胞清洗液）洗滌細(xì)胞3次。

4、吸去清洗液，加入37℃預(yù)熱的染色液。37℃孵育3-16h或直至細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色，可用保鮮膜封住培養(yǎng)皿以防止染色液的蒸發(fā)。

5、在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)，呈現(xiàn)藍(lán)色的細(xì)胞為衰老細(xì)胞。如果不能及時(shí)觀察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封邊劑封片后4℃長期保存。

第二個(gè)就是懸浮細(xì)胞衰老檢測的實(shí)驗(yàn)步驟：

1、收集細(xì)胞：離心收集待測的懸浮細(xì)胞，用PBS或細(xì)胞清洗液洗滌細(xì)胞三遍。

2、洗去清洗液：離心后吸去清洗液，加入固定液懸浮細(xì)胞，室溫?fù)u床上固定細(xì)胞15 min。

3、洗去固定液：用PBS或細(xì)胞清洗液洗滌細(xì)胞三次，再吸去清洗液。

4、加入37℃預(yù)熱的染色液至懸浮細(xì)胞，37℃孵育3-16h或直到細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色，最好把整個(gè)片子浸泡在染色液中，然后用保鮮膜封住器皿以防止染色液的蒸發(fā)。

5、取染好色的細(xì)胞，添加到載玻片或六孔板內(nèi)。

6、在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：呈現(xiàn)藍(lán)色的細(xì)胞為衰老細(xì)胞。如果不能及時(shí)觀察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封邊劑封片后4℃長期保存。

最后就是組織切片衰老檢測的操作步驟：

1、石蠟切片先按照常規(guī)的方法進(jìn)行脫蠟和水化處理，如果樣本是冰凍切片可以直接進(jìn)行下一步。石蠟且切片的脫蠟我們可以參考以下的脫蠟步驟：

（1）脫蠟前，將組織切片于 60℃恒溫箱中烘烤2.5h；

（2）組織切片置于二甲苯中浸泡15 min；

（3）更換二甲苯后再浸泡15 min；

（4）無水乙醇中浸泡5 min；

（5）90%乙醇中浸泡5 min；

（6）80%乙醇中浸泡5 min；

（7） 70%乙醇中浸泡5 min；

2、加入適當(dāng)固定液，以充分覆蓋住組織為宜，室溫固定細(xì)胞15min

3、吸去固定液，用PBS（或試劑盒里的細(xì)胞清洗液）洗滌細(xì)胞3次。

5、在光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：呈現(xiàn)藍(lán)色的細(xì)胞為衰老細(xì)胞。如果不能及時(shí)觀察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封邊劑封片后4℃長期保存。

好啦！用β-半乳糖苷酶法來檢測貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞、組織切片實(shí)驗(yàn)具體操作方法咱們就解釋到這里啦，如果您有不同的意見或者更好的操作歡迎留言跟我們分享，如果您有細(xì)胞衰老實(shí)驗(yàn)外包的需求，請(qǐng)一定認(rèn)準(zhǔn)——普拉特澤生物！

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