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   細(xì)胞凋亡實驗檢測詳細(xì)步驟由普拉特澤生物流式檢測平臺總結(jié)分享，普拉特澤生物為廣大科研人員提供全面的生物醫(yī)學(xué)科研實驗外包服務(wù)，真實準(zhǔn)確，值得信賴。

   上篇我們給大家詳細(xì)解釋了什么是細(xì)胞凋亡，相信大家都有一個相對清晰的了解，那么說完了細(xì)胞凋亡的概念我們來看看如何檢測細(xì)胞凋亡，本文分享的是用流式檢測細(xì)胞凋亡的實驗步驟，一起來學(xué)習(xí)吧。

   第一步、制備凋亡檢測細(xì)胞：選擇一盤10cm皿陽性細(xì)胞，打開培養(yǎng)皿的蓋子，將細(xì)胞置于紫外線下照射2小時，或使用細(xì)胞凋亡陽性對照試劑盒提前處理陽性待測細(xì)胞。

   第二步、收集凋亡檢測細(xì)胞：將待測陰性細(xì)胞與陽性細(xì)胞的上清分別收集于15mL的離心管中，使用2mL的BSP沖洗細(xì)胞，加入1mL不含有EDTA的胰酶至37度的培養(yǎng)箱中消化，直到大片細(xì)胞都脫離培養(yǎng)皿底。用剛才收集的上清液終止消化后，轉(zhuǎn)移到剛才的15mL離心管內(nèi)，放到離心機(jī)上，2000rpm室溫離心5 min，棄上清。

   第三步、清洗凋亡檢測細(xì)胞：用1mL常溫PBS重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管，棄上清，細(xì)胞清洗這一步很重要不能省略，防止影響上機(jī)檢測時的實驗結(jié)果。

   第四步、凋亡檢測細(xì)胞計數(shù)：每組取2x10^6細(xì)胞。將計數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計數(shù)板上，輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞均勻分布;吸出少許細(xì)胞懸液滴在細(xì)胞入口,使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計數(shù)板之間,靜置1-2 min,使細(xì)胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中。在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),壓在大格四周邊線上的細(xì)胞只計數(shù)壓在2條邊線上的細(xì)胞(如右側(cè)和下方);若鏡下有2個細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),則應(yīng)按單個細(xì)胞計算;若細(xì)胞團(tuán)數(shù)量較多,占細(xì)胞總量的10%左右,則說明細(xì)胞分散不好會導(dǎo)致計算不準(zhǔn)確,需要重新制備細(xì)胞懸液。

   第五步、凋亡檢測細(xì)胞染色：使用200uL緩沖液重懸細(xì)胞(2*106)，所有實驗組與陰性對照需要雙染，陽性對照需要設(shè)置兩個染料的單染管。雙染管加入5uLAnnexinV染料，5uL7-AAD，單染管加入單獨的5uLAnnexinV染料或5uL7-AAD，標(biāo)清楚單染染料名稱。用手彈勻，避光染色15 min。染色過程中準(zhǔn)備流式管和濾膜打開流式細(xì)胞儀，檢查鞘液和廢液情況。

   第六步、凋亡檢測細(xì)胞過濾：染色完畢后，加入1mLBPS，上離心機(jī)2000rpm，在室溫下離心5分鐘，棄上清。再加入100ulPBS重懸，過濾。

   第七步、上流式細(xì)胞儀檢測：打開SSC，FSC，BB515下的FITC通道，以及7-ADD通道，其他用不到的通道刪除，記錄檢測數(shù)據(jù)方便后期分析結(jié)果。

   到此為止，細(xì)胞凋亡實驗檢測詳細(xì)步驟我們就全部介紹完啦，還有不懂的或者補(bǔ)充的同學(xué)們可以給客服留言積極討論哦~有需要細(xì)胞凋亡檢測外包的老師歡迎隨時聯(lián)系普拉特澤，竭誠為您服務(wù)。