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今天普拉特澤生物跟大家一起學習一個新的實驗技術——酵母雙雜交系統(tǒng)。酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid system）的建立是基于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。普拉特澤生物——分子檢測平臺長期承接酵母雙雜實驗代做，今天就來跟大家一起簡單學習一下什么是酵母雙雜系統(tǒng)。

酵母雙雜交系統(tǒng)是將待研究的兩種蛋白質分別克?。ㄈ诤希┑浇湍副磉_質粒的轉錄激活因子（如GAL4等）的DNA結合結構域（DNA-BD）和轉錄激活域（AD）上，構建成融合表達載體，從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質相互作用的系統(tǒng)。

雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。細胞起始基因轉錄需要有反式轉錄激活因子的參與。80年代的工作表明，轉錄激活因子在結構上是組件式的（modular），即這些因子往往由兩個或兩個以上相互獨立的結構域構成，其中有DNA結合結構域（DNA binding domain，簡稱為BD）和轉錄激活結構域（activation domain，簡稱為AD），它們是轉錄激活因子發(fā)揮功能所必需的。單獨的BD雖然能和啟動子結合，但是不能激活轉錄。而不同轉錄激活因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的激活轉錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性激活結構域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結合到Gal4結合位點并激活轉錄。

Fields等人的工作標志著雙雜交系統(tǒng)的正式建立。他們以與調控SUC2基因有關的兩個蛋白質Snf1和Snf2為模型，將前者與Gal4的BD結構域融合，另外一個與Gal4的AD結構域的酸性區(qū)域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分別稱之為“誘餌”（bait）和“獵物”或靶蛋白（prey or target protein）。發(fā)展起來的各種雙雜交系統(tǒng)大多是以Fields等人建立的系統(tǒng)為基礎的。

在雙雜交鑒定過程中要經(jīng)過兩次轉化，這個工作量是相當大的，特別是尋找新的作用蛋白質的時候尤其如此。Bendixen等人通過酵母接合型的引用，避免了兩次轉化操作，同時又提高了雙雜交的效率。在酵母的有性生殖過程中涉及到兩種配合類型：a接合型和α接合型，這兩種單倍體之間接合（mating）能形成二倍體，但a接合型細胞之間或α接合型細胞之間不能接合形成二倍體。

酵母雙雜交系統(tǒng)能在體內測定蛋白質的結合作用，具有高度敏感性。

主要是因為：

①采用高拷貝和強啟動子的表達載體使雜合蛋白過量表達。

②信號測定是在自然平衡濃度條件下進行，而如免疫共沉淀等物理方法為達到此條件需進行多次洗滌，降低了信號強度。

③雜交蛋白間穩(wěn)定性可被激活結構域和結合結構域結合形成轉錄起始復合物而增強，后者又與啟動子DNA結合，此三元復合體使其中各組分的結合趨于穩(wěn)定。

④通過mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號放大。同時，酵母表型，X-Gal及HIS3蛋白表達等檢測方法均很敏感。

好啦，酵母雙雜系統(tǒng)的介紹我們就簡單講到這里啦，有什么不懂的可以給客服留言，我們會及時給到您回復的，如果您有酵母雙雜試驗外包需求的話也歡迎直接留言，下期給大家介紹實驗的操作步驟，我們下期見！

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