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Masson三色染色又稱馬松染色,是顯示組織中纖維的主要方法之一。普拉特澤生物承接Masson（馬松）染色等病理染色相關(guān)服務(wù)上萬(wàn)例，積累了操作大量經(jīng)驗(yàn)，為大家詳細(xì)分享馬松染色的實(shí)驗(yàn)操作步驟與染色結(jié)果分析，同時(shí)為廣大科研工作者開(kāi)展線上的理論培訓(xùn)與線下實(shí)操，可承接染色實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)。

Masson（馬松）染色

Masson染色法是結(jié)締組織染色中最經(jīng)典的一種方法,其原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān),分子的大小由分子量來(lái)體現(xiàn),小分子量易穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織;而大分子量則只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的組織。然而,淡綠或苯胺藍(lán)的分子量都很大,因此Masson染色后肌纖維呈紅色,膠原纖維呈綠色或藍(lán)色,主要用于區(qū)分膠原纖維和肌纖維。

傳統(tǒng)的馬松染色使用四種染料，使組織切片呈現(xiàn)三種顏色，準(zhǔn)確的稱呼是馬松三色染色法（Masson's trichrome stain）。第一種染料是蘇木精，配制成Weigert氏鐵蘇木精液，與HE染色相似，這里的蘇木精也是染細(xì)胞核，由于用的是鐵蘇木精，細(xì)胞核染色后不是經(jīng)典HE染色的藍(lán)色，而是呈現(xiàn)暗灰黑色，這是第一色。第二種染料酸性品紅和第三種染料麗春紅配制成混合溶液，這兩種紅色染料染與HE染色中的伊紅相似，可以染細(xì)胞質(zhì)為紅色，這是第二色。第四種染料是甲基藍(lán)（苯胺藍(lán)也可），染膠原纖維為藍(lán)色，這是第三色。經(jīng)典的馬松染色效果與HE染色對(duì)比如下圖：

這是小鼠皮膚組織兩種病理染色圖片，左邊是馬松三色染色，右邊是HE染色。

右邊HE染色呈現(xiàn)藍(lán)色和紅色兩種顏色，而左邊馬松三色染色有灰黑色、紅色和藍(lán)色三種顏色，尤為明顯的是藍(lán)色。左圖中的大片藍(lán)色區(qū)域是皮膚上皮組織，結(jié)構(gòu)較為疏松，含有較多的膠原纖維，被馬松三色染色法中的甲基藍(lán)染成藍(lán)色。這樣染色后，可以清晰地看到毛孔在上皮結(jié)蹄組織中的分布。因此，被染成藍(lán)色的細(xì)胞外基質(zhì)（通常都含有膠原纖維）就能和細(xì)胞以及其他組織形成鮮明的對(duì)比，從而易于觀察。在某些病理狀態(tài)，如心肌梗死，肝硬化和腎纖維化等情況下，病變的細(xì)胞會(huì)被結(jié)締組織取代，用馬松染色能很好地發(fā)現(xiàn)病變部位，并能對(duì)病變進(jìn)行定量的評(píng)估。因此，直到今天，馬松染色依然是組織學(xué)和病理學(xué)中活躍的染色方法，并出現(xiàn)了幾種改良的馬松染色，使得染色效果更加理想。

Masson（馬松）染色實(shí)驗(yàn)操作試劑準(zhǔn)備：

1、Regaud 氏蘇木精：蘇木精1g，95%酒精10 ml，甘油10 ml，蒸餾水8 0ml，將蘇木精加入蒸餾水內(nèi)加溫溶解,冷卻后加入酒精和甘油,放數(shù)日后即可應(yīng)用。

2、Masson麗春紅酸性復(fù)紅液：麗春紅0.7g，酸性復(fù)紅0.3g，蒸餾水99 ml，冰醋酸1ml。

3、0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸餾水100 ml。

4、1%磷鉬酸水溶液：磷鉬酸1g，蒸餾水100 ml。

5、苯胺藍(lán)水溶液：苯胺藍(lán)2g，蒸餾水98 ml，冰醋酸2 ml。

6、1%光綠水溶液：光綠 1g，蒸餾水100 ml。

Masson（馬松）三色法染色實(shí)驗(yàn)操作步驟：

1．石蠟切片脫蠟至水。

2．鉻化處理或去汞鹽沉淀（甲醛固定的組織此步可略）。

3．依次自來(lái)水和蒸餾水洗。

4．用Regaud蘇木精染液或Weigert蘇木精液染核5-10 min。

5．充分水洗,如過(guò)染可鹽酸酒精分化。

6．蒸餾水洗。

7．用Masson 麗春紅酸性復(fù)紅液5-10 min。

8．以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

9． 1%磷鉬酸水溶液分化3-5 min。

10. 不經(jīng)水洗,直接用苯胺藍(lán)或光綠液染5 min。

11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。

12．95%酒精、無(wú)水酒精、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封固。

Masson染色預(yù)期結(jié)果：膠原纖維、粘液、軟骨呈藍(lán)色（如光綠液染色為綠色），胞漿、肌肉、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈紅色，核黑藍(lán)色。

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