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        大家好，今天普拉特澤帶大家一起學(xué)習(xí)的是耐藥細(xì)胞株的構(gòu)建步驟，腫瘤細(xì)胞對化療藥物產(chǎn)生耐藥性是腫瘤治療失敗的重要因素之一，耐藥細(xì)胞株的構(gòu)建是探索腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的原因及改善的重要方法。普拉特澤生物工具平臺承接大量的生物醫(yī)學(xué)科研人員研究用耐藥細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，為廣大攻克腫瘤治療的實驗人員提供技術(shù)上的幫助，耐藥細(xì)胞株構(gòu)建，就找普拉特澤~

        一種藥物長期作用于某類細(xì)胞，殺死其中沒有抗性的細(xì)胞，而對這類細(xì)胞中具有抗性的細(xì)胞不能殺死，即進(jìn)行了選擇。具有抗性的細(xì)胞大量繁殖產(chǎn)生很多抗性后代，但再用這種藥物時表現(xiàn)出的藥效大大下降的現(xiàn)象就是細(xì)胞的耐藥性，采用體外低濃度梯度遞增聯(lián)合大劑量間斷沖擊方法誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對特定藥物產(chǎn)生耐藥性，從而構(gòu)建出對特定藥物產(chǎn)生耐藥性的腫瘤細(xì)胞株。

        現(xiàn)在我們就來看看，耐藥細(xì)胞株的詳細(xì)構(gòu)建的詳細(xì)操作步驟？（以阿帕替尼耐藥株為例）：

        1、細(xì)胞復(fù)蘇

        (1) 將ddH₂O預(yù)溫至37℃。

        (2) 戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細(xì)胞的凍存管（內(nèi)有1 mL細(xì)胞混合液），立即投入37℃ ddH₂O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內(nèi)快速溶解。

        (3) 完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進(jìn)超凈臺。

        (4) 在超凈臺中，在15 mL滅菌離心管中預(yù)先加入10 mL新鮮配制的培養(yǎng)基，打開凍存管，將所有凍融的細(xì)胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養(yǎng)液。

        (5) 1mL培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)基至5 mL，置于37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

        (6) 48小時后換液，細(xì)胞融合接近80%時即可傳代。

        2、細(xì)胞給藥+培養(yǎng)

        HSC-3細(xì)胞用含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM培養(yǎng)基，在37℃飽和濕度、含5% CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

        3、細(xì)胞處理

        向細(xì)胞中加入10.36μg/mL阿帕替尼進(jìn)行處理，至篩選出可以在含有10.36μg/mL阿帕替尼的培養(yǎng)基中穩(wěn)定傳代的細(xì)胞。

        好啦，那關(guān)于耐藥細(xì)胞株構(gòu)建的實驗步驟小編就介紹到這里啦，如果和您的操作步驟不一樣歡迎隨時聯(lián)系我們，可以和咱們實驗的技術(shù)交流探討的。如果您有耐藥細(xì)胞株構(gòu)建外包的需求，歡迎隨時聯(lián)系~