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非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型關(guān)鍵指標檢測指南：肝重比、ALT、TG的標準化實驗方法

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是NAFLD的進展階段，表現(xiàn)為肝臟脂肪變性、炎癥和纖維化。在NASH小鼠模型研究中，肝重比（Liver/Body Weight Ratio）、血清ALT（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）、肝臟TG（甘油三酯）是評估疾病進展的核心指標。

——非酒精性脂肪肝（NASH）小鼠模型關(guān)鍵指標檢測指南由普拉特澤生物動物實驗平臺為大家總結(jié)分享。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩(wěn)定的非酒精性脂肪肝小鼠模型外包實驗服務(wù)——本文將詳細介紹這些指標的檢測原理、實驗步驟及常見問題解決方案，幫助科研人員獲得準確、可重復的數(shù)據(jù)。

1. 肝重比（Liver/Body Weight Ratio）檢測

意義：評估肝臟腫大程度，反映脂肪沉積和炎癥程度。

實驗步驟

●小鼠稱重：禁食4-6小時后，稱量小鼠體重（g）。

●肝臟摘?。喊矘匪篮笱杆偃〕鐾暾闻K，用預冷PBS沖洗血跡，濾紙吸干表面水分。

●稱肝重：精確稱量肝臟濕重（g）。

計算肝重比：

注意事項

?標準化操作：所有小鼠禁食時間一致，避免食物影響肝臟重量。

? 快速取材：肝臟離體后易失水，需在10分鐘內(nèi)完成稱重。

?排除異常樣本：若肝臟有肉眼可見腫瘤或嚴重壞死，需記錄并剔除。

2. 血清ALT（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）檢測

意義：ALT是肝損傷的關(guān)鍵標志物，NASH模型中ALT升高提示肝細胞損傷。

●實驗方法

（1）采血與血清制備

眼眶取血/心臟穿刺：收集全血至EP管，室溫靜置30分鐘。

離心分離血清：4℃、3000 rpm離心15分鐘，取上清（避免溶血）。

（2）ALT檢測（推薦試劑盒法）

原理：ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反應(yīng)生成丙酮酸，通過檢測NADH吸光度變化（340 nm）計算酶活性。

步驟：按試劑盒（如碧云天ALT檢測試劑盒）說明書操作，通常包括：
1.配制反應(yīng)混合液

2.加入血清樣本

3.酶標儀測定OD值

4.根據(jù)標準曲線計算ALT濃度（U/L）

常見問題與優(yōu)化

溶血影響：紅細胞破裂會釋放ALT，導致假陽性，需輕柔操作避免溶血。

樣本保存：血清4℃可存24小時，-80℃長期保存（避免反復凍融）。

3. 肝臟TG（甘油三酯）檢測

意義：TG沉積是NASH的核心特征，定量TG可評估脂肪變性程度。

?實驗流程

（1）肝臟樣本處理

組織勻漿：取50-100 mg肝組織，加入1 mL異丙醇（或氯仿:甲醇=2:1），勻漿器冰上破碎。

離心提取脂質(zhì)：12,000 rpm、4℃離心10分鐘，取上清。

（2）TG測定（推薦GPO-PAP法）

原理：甘油三酯被脂蛋白脂肪酶水解為甘油，經(jīng)酶偶聯(lián)反應(yīng)生成醌亞胺，在546 nm測吸光度。

步驟（以南京建成試劑盒為例）：

配制工作液

①加入樣本和標準品

②37℃孵育10分鐘

③酶標儀檢測，計算TG含量（mmol/g蛋白或mg/g組織）

關(guān)鍵注意事項

⒈標準化取樣：同一肝葉位置（如左葉）取樣，避免區(qū)域差異。

⒉校正總蛋白：建議用BCA法測勻漿總蛋白，以mmol/mg蛋白為單位更準確。

4. 數(shù)據(jù)解讀與NASH模型驗證

⒈肝重比：NASH小鼠通常＞5%（正常小鼠約4%）。

⒉ALT：NASH模型ALT＞50 U/L（正常＜30 U/L）。

⒊TG：高脂飲食模型TG可達正常肝的3-5倍。

建議結(jié)合其他指標：

組織學（HE染色觀察脂肪變性、天狼星紅染色評估纖維化）

炎癥因子（TNF-α、IL-6 ELISA）

5. 實驗優(yōu)化與FAQ

Q：ALT檢測為何要用空腹血清？

→ A：進食后脂血可能干擾吸光度檢測。

Q：TG提取用異丙醇還是氯仿-甲醇？

→ A：異丙醇更安全，但氯仿-甲醇提取效率更高（需通風櫥操作）。

Q：肝重比異常高可能原因？

→ A：除脂肪沉積外，需排除肝臟充血、腫瘤或采樣誤差。

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