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        今天普拉特澤生物跟大家一起學習的就是——EDU法檢測細胞增殖實驗操作步驟。細胞增殖的能力是評價細胞、代謝、生理、病理狀況、細胞活性、基因毒性等的重要指標之一，上兩篇我們學習了最常用的cck8法和MTT法檢測細胞增殖，今天一起來看看EDU法如何進行細胞增殖的檢測吧

細胞增殖檢測之MTT法【附視頻教程】
cck8法檢測細胞增殖詳細操作步驟【附視頻教程】

        EdU可以說是一款革命性的細胞增殖狀態(tài)檢測方法與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內更容易擴散，不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。

        EDU檢測細胞增殖實驗詳細操作步驟如下：

        一、首先用EdU來標記細胞

        細胞，如果使用其它類型的細胞，實驗可能需要做調整。建議EdU起始濃度是10mM，或者根據(jù)細胞類型設置幾個梯度預實驗進行預實驗，再進行正式實驗。

        1.在六孔板里的蓋玻片上培養(yǎng)細胞，使其生長至所需密度后處理細胞;

        2.用10mM EdU溶液在無血清培養(yǎng)基中制備2xEdU工作溶液;

        3.預熱2x EdU溶液，然后將2xEdU溶液添加到等體積含有實驗細胞的培養(yǎng)基中，獲得1xEdU溶液。例如，對于zui終濃度為10M的溶液，可用20MEdu注意：建議不要更換所有的培養(yǎng)基，因為這會影響細胞增殖速率;將處理好的細胞孵育12小時;孵育完成后立即進行下一步。

        二、細胞固定和透化

        1,孵育后除去培養(yǎng)基，并向每個含有蓋玻片的孔中加入2.5mL含多聚甲醛的 PBS，室溫下孵育15分鐘;

        2.除去固定液，用2.5mLPBS洗滌孔中的細胞5分鐘，重復三遍;

        3.除去洗滌液，然后向前五個孔中加入2.5mL通透液，室溫下孵育20分鐘:

        4.除去通透緩沖液，用2.5mLPBS洗滌每個孔中的細胞兩次，除去洗滌液;

        5.立即進入步驟C。

        三、 EdU檢測

        每孔使用100L反應混合物。反應混合物體積可根據(jù)實際情況進行調節(jié)，但必須按比例加入反應組分。

        1.制備 Click-iT 反應混合物。注意要按表中列出的順序添加成分，否則反應將無法得到 zui佳效果。配置好的Click-iT反應混合物必須在15分鐘內使用。

        2.向每個玻片上加入100Click-iT反應混合物，室溫下避光孵育30分鐘;

        3.除去反應混合物，用2.5 mLPBS洗滌每孔一次后，除去洗滌液;

        可選擇步驟:進行核染色(DAPl或Hoechst33342)或抗體標記

        提示：在孵育過程中一定要避光。如不需要其它染色，孵育后請直接進行成像和分析

        好啦，那EDU檢測細胞增殖的操作步驟我們就介紹到這里啦，需要細胞增殖檢測實驗外包或還有更多不懂的歡迎留言，技術免費為大家答疑解惑~我們下期見！