
cck8檢測原理和實驗步驟
2023-03-10 11:10:32
來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺
CCK-8(Cell Counting Kit-8)檢測實驗是一種廣泛用于評估細胞生存率和細胞增殖能力的試劑盒。
CCK-8檢測實驗原理是基于其反應(yīng)機制,基于細胞線粒體呼吸活性的變化,即細胞內(nèi)還原劑可以將CCK-8試劑內(nèi)的三唑基四氮唑(WST-8)還原成有色產(chǎn)物。這種有色
產(chǎn)物可以通過吸光度測量的方式進行定量分析,從而評估細胞數(shù)量和代謝活性。
以下是CCK8檢測的步驟:
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1.培養(yǎng)細胞:將需要檢測的細胞分裝到培養(yǎng)皿中,添加培養(yǎng)液,使其繼續(xù)生長和分裂。
2.處理藥物:將需要檢測的藥物按照一定的濃度加入培養(yǎng)液中,使其與細胞接觸。
3.添加CCK8試劑:在一定時間后,將CCK8試劑加入培養(yǎng)液中,使其與細胞接觸。
4.孵育:將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中,孵育一定時間,使CCK8試劑與細胞產(chǎn)生反應(yīng)。
5.測量:測量培養(yǎng)皿中吸光度的變化,可以通過酶標儀等設(shè)備測定吸光度值,計算出細胞的增殖率和毒性。
CCK8試劑中含有水溶性四唑鹽(WST-8)和電子傳遞介體1-甲基三唑基甲烷(MTT)類似,它可以被細胞內(nèi)線粒體呼吸鏈中的酶還原成橙色產(chǎn)物,這個橙色產(chǎn)物的含
量與細胞數(shù)量和代謝活性有關(guān),因此可以通過檢測橙色產(chǎn)物的濃度來判斷細胞的增殖率和毒性。
CCK-8試劑盒中的WST-8是一種水溶性化合物,在存在還原劑(如NADH、NADPH等)的情況下,可以被還原成高度水溶性的有色產(chǎn)物formazan。這種產(chǎn)物的形成與細胞
代謝活性相關(guān),因此可以用于定量評估細胞增殖和存活率。
總體而言,CCK-8試劑盒是一種方便、快速和準確的細胞代謝活性評估工具,適用于各種細胞類型和實驗設(shè)計。