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大家好，今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是冰凍切片實驗的注意事項，冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法，制作過程快捷、簡便，但在實際的操作過程中也有很多需要注意的細(xì)節(jié)，普拉特澤生物病理實驗平臺根據(jù)承接的多例冰凍切片實驗代做特地特地為大家總結(jié)分享其注意事項，希望能幫到大家~

本文從冰凍切片的操作前的制備與切片制作過程要注意的問題兩個方面詳細(xì)分享~

首先是冰凍切片實驗制備的注意事項：

1、新鮮組織的制備

組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有：① CO2氣（－78℃） ② 丙酮干冰冷卻的輕石油醚、乙烷和庚烷（－80℃） ③ 液氮（－190℃）④ 液氮冷卻的丙烷（－19℃）。液氮適用于組織化學(xué)，較安全。缺點：組織塊易發(fā)生龜裂。

2、固定組織的制備

為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4℃、24小時的甲醛固定能很好地保存酶類。但對許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲醛短時間固定（10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。

電鏡出現(xiàn)后，需要保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，以4%緩沖戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7．）84ml；蔗糖8g）固定較好。這些固定液主要用于水解酶，而不適于許多氧化還原酶和轉(zhuǎn)移酶。

3、恒冷箱的溫度

一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時再切，一般組織在－15～－20℃切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度，常見組織適應(yīng)溫度如下：

注：固定組織一般高3-5度

4、切片機(jī)的使用

抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過?？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c?？蓱{經(jīng)驗調(diào)整刀對組織的角度，一般新刀為20゜。操作程序：先接通電源，調(diào)定恒冷箱溫度，調(diào)整切片刀的角度，調(diào)定切片厚度，標(biāo)本置載臺致冷達(dá)所需溫度后，將其安放在切片機(jī)推進(jìn)器上。即可切片。恒冷箱視使用情況每周或每月清潔一次冰霜。新刀切片滿意，舊刀用自動磨刀機(jī)磨刀較好。如果切片刀與抗卷板的位置，角度合乎要求，又有一把銳利的刀，就能獲得理想的切片。

其次就是制作冰凍切片操作過程中的注意事項：

1、防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈，需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因為這個地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

2、多例多塊組織同時需做冰凍切片時，可各自放于不同的支承器上，于冷凍臺上凍起來，然后依據(jù)不同的編號，依序切片，這樣做既不費時也不會亂。

3、放置組織冰凍前，應(yīng)視組織的形狀及走勢來放置，所謂“砍柴看柴勢”，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。

4、組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達(dá)到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預(yù)先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會出現(xiàn)冰晶。這是因為含水的固定液在組織未經(jīng)固定前，其中的水分也可滲入到組織中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時，這些水分就存留于組織中，形成了冰晶。

5、當(dāng)切片時，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點。

6、用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因為當(dāng)附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由于兩種物質(zhì)間溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時，分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由于溫度相同，沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。

好啦！冰凍切片制作過程中要注意的問題我們就總結(jié)到這里啦，還有更多關(guān)于冰凍切片制作的問題和歡迎隨時留言，如有冰凍切片代做、外包的服務(wù)歡迎隨聯(lián)系哦~

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