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  今天來(lái)給大家分享WB實(shí)驗(yàn)的原理以及流程圖。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長(zhǎng)期穩(wěn)定生物實(shí)驗(yàn)，本文給大家分享咱們技術(shù)長(zhǎng)期總結(jié)下來(lái)的WB實(shí)驗(yàn)原理以及流程

一、Western blot實(shí)驗(yàn)原理

WB實(shí)驗(yàn)是Western Blotting的縮寫(xiě)，也稱(chēng)為免疫印跡實(shí)驗(yàn)，是一種用于檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的方法。采用的是聚丙烯酰胺凝膠 (PAGE) 電泳，被檢測(cè)物是

蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式
 
吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的特異性抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或

同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。

該實(shí)驗(yàn)通常分為以下幾個(gè)步驟：

蛋白質(zhì)提?。簭募?xì)胞或組織中提取蛋白質(zhì)，通常使用一種稱(chēng)為RIPA緩沖液的提取緩沖液。

蛋白質(zhì)分離：將提取的蛋白質(zhì)通過(guò)電泳分離，常用的電泳方法包括SDS-PAGE和非變性PAGE。

轉(zhuǎn)移：將分離的蛋白質(zhì)通過(guò)電泳轉(zhuǎn)移到聚合物膜上，通常使用的聚合物膜是聚丙烯酰胺凝膠膜或硝酸纖維素膜。

阻斷：用一種稱(chēng)為“阻斷液”的液體在聚合物膜上進(jìn)行非特異性結(jié)合，防止非特異性的抗體結(jié)合到聚合物膜上。

一次抗體孵育：使用一種特異性抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合。

二次抗體孵育：使用一種標(biāo)記有酶或熒光物質(zhì)的二次抗體與一次抗體結(jié)合，以標(biāo)記目標(biāo)蛋白質(zhì)。

檢測(cè)：使用化學(xué)發(fā)光或熒光儀器檢測(cè)熒光或酶反應(yīng)，確定目標(biāo)蛋白質(zhì)的位置和數(shù)量。

二、以下是WB實(shí)驗(yàn)的流程圖：

蛋白質(zhì)提取 -> 蛋白質(zhì)分離 -> 轉(zhuǎn)移 -> 阻斷 -> 一次抗體孵育 -> 二次抗體孵育 -> 檢測(cè)


                                       (附WB實(shí)驗(yàn)流程圖）

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