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巨噬細胞是先天免疫系統(tǒng)的一種特殊的、長壽命的吞噬細胞。巨噬細胞是三種吞噬細胞類型之一，還有粒細胞（中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞）和樹突狀細胞（DCs）。

一般來說，巨噬細胞可根據(jù)其功能和活化程度分為兩個亞型：經(jīng)典激活的M1巨噬細胞和交替激活的M2巨噬細胞；極化的這種性質(zhì)表示頻譜的相對兩端，僅指在給定的時間和位置上的激活。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了M1巨噬細胞具有與對細菌和細胞內(nèi)病原體的免疫反應相關的促炎作用。另一方面，M2具有更多的抗炎作用，在血管生成和傷口愈合中具有相關功能。M2還與2型T輔助反應（Th2）有關，例如蠕蟲免疫、哮喘和過敏。

M1型巨噬細胞表達MHC II、CD80、CD86和 CD16/32，分泌TNF-α、IL-6和IL-12等促炎因子，以及CXCL9、CXCL10和CXCL11等趨化因子。另外，M2型巨噬細胞高表達arginase-1(Arg1)和CD206，分泌抗炎因子IL-10以及CCL2、CCL17和CCL22等趨化因子（如下圖） 。

-----------------------文中部分內(nèi)容摘自賽默飛 賽默飛生命科學

腹腔中M1和M2型巨噬細胞流式染色實例

Mouse (腹腔貼壁細胞): M1和M2型巨噬細胞

1.標志物：

M1: F4/80+CD11b+CD86+ cells；M2: F4/80+CD11b+CD206+cells；

2. 流式細胞儀：Beckman Coulter，CytoFLEX；

3.流式抗體及用量：

PE anti-mouse CD86 (1μg/test，105007，BioLegend)；APC anti-mouse CD206 (0.5μg/test，141707，BioLegend)；PerCP-Cy5.5 anti-mouseCD11b (0.25μg/test，101227，BioLegend)；

AF488 anti-mouse F4/80 (1μg/test，123119，BioLegend)；

4.染色條件：首先FcRblock孵育(1μg/test；101319；BioLegend)，4℃，5-10min； 接著F4/80、CD11b、CD86表面染色， 4℃，30min；

5.細胞固定：PBS洗滌細胞2~3次，加入細胞固定液（Fixation Buffer，500ul，420801，BioLegend）室溫避光固定30min。

6.細胞膜通透：150g離心5 min棄掉固定液，加入2mL用ddH2O 10倍稀釋后的10×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer（421002，BioLegend）重懸細胞，150g離心5min棄上清，重復步驟2~3次。

7.胞內(nèi)染色：100μL1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer重懸細胞，加入CD206抗體（0.5μg/tests，141707，BioLegend），室溫避光孵育30min。孵育完畢后，2ml1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer洗滌細胞2~3次，加入500μL cell staining buffer重懸細胞，上機。

8.分析軟件：Flowjo (10.0.7)；

9. 圈門策略及染色: (見下圖)。