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Western Blot簡稱WB實(shí)驗(yàn)，這是我們常用到的一種檢測(cè)細(xì)胞或組織中蛋白含量的技術(shù)手段。原理是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。聽起來是不是很簡單，但對(duì)于正在做WB的小伙伴來說，小編只想說“路漫漫其修遠(yuǎn)兮”。

接下來就給大家講講WB那些奇葩條帶的問題：

大家都知道單WB實(shí)驗(yàn)周期大約為2天，大致可以分為忙碌的第一天和驚心的第二天。

第一天，從第一步的配膠，到最后一步的孵育一抗；

第二天，經(jīng)過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，之后便迎來了驗(yàn)證奇跡的一刻：顯影，皆大歡喜或者一切皆空。

那么顯影時(shí)，都遇到過哪些奇葩的條帶呢？？？

1. 出現(xiàn)黑點(diǎn)或黑斑

原因：

(1)一般出現(xiàn)這種情況可能是封閉液溶解不完全或封閉液存放時(shí)間太久；

(2)抗體中可能存在雜質(zhì)；

(3)試劑污染；

解決方法：

(1)過濾封閉液或選用其他類型封閉液；

(2)與其他品牌已驗(yàn)證過好用的抗體處理相同樣本，作比較，看是否還有斑點(diǎn)；

(3)更換試劑；

2. 條帶中出現(xiàn)邊緣規(guī)則的白圈

原因：

(1)轉(zhuǎn)膜時(shí)膜和膠中間有氣泡;

(2)抗體在膜上未均勻分散；

解決方法：

(1)制備“三明治”時(shí)用玻璃棒趕去氣泡；

(2)使用搖床孵育抗體；

3. 條帶扭曲，如微笑帶

原因：

(1)膠未配好（凝膠未能完全聚合，膠中有顆?；驓馀?，凝膠未冷卻好；

(2)電壓過高；

(3)上樣量過大或膠孔中的液體體積不同，差別很大；

解決方法：

(1)正確添加質(zhì)量合格且未過期的AP及TEMED；

(2)過濾配膠的試劑保證配膠過程中膠內(nèi)無氣泡；

(3)凝膠冷卻好后再上樣；

(4)降低電壓；

4. 條帶中間出現(xiàn)白色（反白）

原因：中心部位高濃度HRP將底物消耗過快，中間部位底物消耗完后無法發(fā)光

解決方法：

(1)降低蛋白量;

(2)降低一抗與二抗的濃度

5. 高背景（雜帶多）

原因：

(1)抗體溶度過高；

(2)曝光時(shí)間過長；

(3)封閉不完全；

解決方法：

(1)降低抗體溶度，設(shè)置不同抗體溶度比進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)；

(2)減少曝光時(shí)間；

(3)更換封閉液的種類，或是調(diào)整封閉液的濃度；

好，本期關(guān)于搞定WB奇葩條帶就說到這里，如果對(duì)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)問題感興趣請(qǐng)記得持續(xù)關(guān)注我們噢！