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ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)操作常見問題答疑【附視頻教程】

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Qustion1：顯色極淺或不顯色

（1）漏加底物成分、底物失效、底物配制濃度計(jì)算錯(cuò)誤；

（2）整個(gè)ELISA過程中存在抗原或抗體不匹配；

（3）整個(gè)ELISA過程中樣品稀釋過度；

（4）稀釋體系錯(cuò)誤，如使用含蛋白質(zhì)成分的試劑進(jìn)行包被。

Qustion2：全板陽性

（1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高，嘗試降低濃度；

（2）使用的封閉試劑不正確，或者未封閉；

（3）酶標(biāo)抗原或抗體與體系中其他試劑有結(jié)合；

（4）底物被酶標(biāo)抗原或抗體污染。

Qustion3：不均勻顯色

（1）酶標(biāo)板質(zhì)量問題，重新檢測(cè)酶標(biāo)板均一性；

（2）包被或加樣過程中有部分孔漏加、少加等情況，可能是操作者不細(xì)心，也可能是移液器漏氣；

（3）加樣時(shí)移液器打入太多氣泡；

（4）選購的酶標(biāo)板不正確，可能誤選其他用途的板子；

（5）溫育過程中板子疊放過厚；

（6）加樣或稀釋過程中試劑沒有充分混勻，或稀釋梯度計(jì)算錯(cuò)誤；

（7）洗板失誤，部分孔未加洗滌液或洗滌液加入去垢劑后未充分混勻，或洗滌過程中帶入氣泡。

Qustion4：顯色過快

（1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高；

（2）某一試劑濃度過高。

Qustion5：顯色過慢

（1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過底，或者標(biāo)記效率低，或者標(biāo)記后免疫活性受影響；

（2）試劑被污染，如HRP酶標(biāo)記的抗原或抗體被疊氮鈉污染；

（3）反應(yīng)溫度過低；

（4）底物緩沖液pH不正確。

Qustion6：背景深

（1）酶標(biāo)抗原或抗體濃度過高；

（2）抗體的非特異性結(jié)合；

（3）抗原或抗體不純；

（4）二抗的種屬交叉識(shí)別。
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